細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
公司產品僅用于科研以下是細胞的訂購信息:
英文簡稱:Duckembryo細胞
產品名稱:鴨子胚胎成纖維細胞;Duckembryo
規格:T25
形態特性:成纖維母細胞樣
生長特性:貼壁生長
特征特性:
培養條件:FM培養基
傳代方法:1:2傳代
貨號:CS-X63214
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞在對數生,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌消化過度,吹打不可太用力,不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍”,傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
實驗報告
一、產分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
N-苯鄰苯二美澳型核果褐腐病菌用途: 能于30℃、48小時內降解82%以上的濃度為60μL/100m的十八烷,對十八烷為碳源(無機鹽培養)
二苯腙短波單胞菌拉丁屬名: Xylaria curta
二苯腙白鱗炭角菌拉丁屬名: Listeria seeligeri
二苯腙斯氏李斯特氏菌拉丁屬名: Streptomyces coerulescens
4-苯-3-硫代氨脲變天藍鏈霉菌拉丁屬名: Sphingobacterium faecium
4-苯-3-硫代氨脲糞鞘氨桿菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
7-氨-4-三氟根瘤菌拉丁屬名: Brevibacillus aydinogluensis
7-氨-4-三氟短芽孢桿菌屬拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
3,5-二氨苯釀酒酵母拉丁屬名: Bacillus brevis
3,5-二氨苯短芽孢桿菌拉丁屬名: Candida boleticola
3,5-二氨苯菌生假絲酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
5-溴噻吩-2-磺酰釀酒酵母拉丁屬名: Aspergillus carbonarius
5-溴噻吩-2-磺酰炭黑曲霉注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
5-噻吩-2-磺酰福氏志賀氏菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
5-噻吩-2-磺酰釀酒酵母注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
2,5-二噻吩-3-磺酰斑玉蕈拉丁屬名: Vishniacozyma victoriae
Duckembryo細胞神經元突觸膜胞外分泌調節蛋白3抗體L-(-)-上腺素 EPINEPHRINE, R-(-)-(RG)Human, Mouse, Rat
神經元突觸膜胞外分泌調節蛋白4抗體戊五/核糖 ADONITOL(RG)Human, Mouse, Rat
認知缺陷突觸相關蛋白SynGAP抗體戊五/核糖 ADONITOL(RG)Human, Mouse, Rat
Kartagener綜合征相關蛋白RSHL3抗體ADHYPERFORIN(SH)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
反義導向分子RGMA抗體ADHYPERFORIN(SH)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
反義導向分子RGMB抗體S-腺苷-L-蛋氨鹽 ADENOSYL-L-METHIONINE IODIDE, S-(RG)Human, Mouse
反義導向分子RGMC抗體S-腺苷-L-蛋氨鹽 ADENOSYL-L-METHIONINE IODIDE, S-(RG)Human, Mouse
軸突導向受體蛋白3抗體S-(5'-腺苷)-L-化蛋氨 ADENOSYL-L-METHIONINE CHLORIDE, S-(RG)Human, Mouse, Rat
G蛋白相關RABX5抗體1-(4-氨丁)胍硫鹽 AGMATINE SULFATE SALT(P)Human, Mouse, Rat