注：本公司提供試劑盒免費代測服務。需要其他Elisa試劑盒請咨詢銷售人員。

試劑盒組成及試劑配制 ：

1. 酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，我司嚴格按照進行，已獲得國家承認的“三證”，每一個產品都有對應的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。

二、樣本

1.內源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解。

ELISA 試驗時，注意事項如下：

1. 正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2. 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1） 固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。

（3） 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。

Phospho-Ack1     磷酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

phospho-AMPK beta 1     磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體

phospho-ALK     磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體

phospho-ATM    磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體

phospho-ATP citrate lyase     磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體

phospho-ATR     磷酸化ATR抗體

AMN1    細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體

ALG11    天連接糖基化11抗體

ASF1A    細胞衰老相關蛋白ASF1A抗體

AGPHD1    氨基糖苷類磷酸結構域蛋白抗體

ASGPR1    唾液酸糖蛋白受體1抗體

ARSF    芳香基硫酸酯酶F抗體

AKAP5    A激酶錨定蛋白5抗體

ATXN3L    小腦脊髓共濟失調蛋白3抗體

ASTE1    ASTE1蛋白抗體

phospho-APG4B    磷酸化自噬相關蛋白4B抗體

AFAP    微絲相關蛋白1抗體

ADORA1    腺苷A1A受體抗體

ARSB    芳基硫酸酯酶B抗體

OxLDL豬氧化低密度脂蛋白檢測試劑盒    OxLDL ELISA Kit

PDGF豬血小板衍生生長因子檢測試劑盒    PDGF ELISA Kit

PAF豬血小板活化因子檢測試劑盒    PAF ELISA Kit

FDP豬血纖蛋白原降解產物檢測試劑盒    FDP ELISA Kit

TXA2豬血栓素A2檢測試劑盒    TXA2 ELISA Kit

TM豬血栓調節蛋白檢測試劑盒    TM ELISA Kit

KLKB1豬血漿測試劑盒    KLKB1 ELISA Kit

Hb豬血紅蛋白檢測試劑盒    Hb ELISA Kit

VWF豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子檢測試劑盒    vWF ELISA Kit

BK豬血管舒緩激肽檢測試劑盒    BK ELISA Kit

ANG-2豬血管生成素2檢測試劑盒    Porcine ANG-2 ELISA Kit

ANG-1豬血管生成素1檢測試劑盒    Porcine ANG-1 ELISA Kit

VCAM-1豬血管內皮細胞粘附分子1檢測試劑盒    VCAM-1 ELISA Kit

t-PA豬組織型纖溶酶原激活劑檢測試劑盒VEGF豬血管內皮細胞生長因子檢測試劑盒    VEGF ELISA KIT

VE-cad豬血管內皮鈣粘著蛋白復合體檢測試劑盒    VE-cad ELISA Kit

ACE2豬血管緊張素轉化酶2檢測試劑盒    ACE2 ELISA Kit

ACE豬血管緊張素轉化酶檢測試劑盒    ACE ELISA Kit

ANG-Ⅱ豬血管緊張素Ⅱ檢測試劑盒    ANG-Ⅱ ELISA Kit

操作流程：

1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

2酶標板置4℃，包被過夜。

3洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。

5酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

6洗板，同4。

7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

8酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

9洗板，同4。

10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應。

12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13數據處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后，計算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標準。