概要
HORIBA Jobin Yvon 引入了一個新的皮秒熒光壽命測量儀器:MF2。熒光科學家們現在有了一個重要的工具可以幫助他們認識實時的自然過程。MF2是基于在HORIBA Jobin Yvon中發展起來的的技術,相對于傳統的方法,它可以使數據收集的速率增加10,000倍,使動力學范圍增加1000倍。
現有的熒光體系提供了靈敏性,選擇性和寬的時間分辨率。有了HORIBA Jobin Yvon的儀器,我們可以測量分子熒光的持續時間為皮秒到納秒之間,甚至于更長。兩種測量方法是“時間相關單光子計數”(TCSPC)和“相位調制”(頻域)。HORIBA Jobin Yvon 在提供基于以上兩種方法的性能的儀器上是有競爭優勢的。頻域記錄了光電倍增管的響應,揭示了與激發光束相關的正弦熒光發射的相位和調制振幅。在幾個調制頻率下進行以上重復測量就得到了熒光壽命。然而,這種方法的時序性質需要更多的時間來完成實驗。很顯然,這種方法需要改進。
HORIBA Jobin Yvon 利用最近在頻率合成方面的進展,專門發展了一種可以避開傳統限制的新技術。通過把多重頻率分組為一種高頻波的形式,極大地擴大了可以得到的頻率范圍,我們把測量熒光壽命的時間從分鐘級降低到毫秒級,達到了10,000倍的改變。我們把這次在儀器使用上的變革稱為MF2,它帶來了以往難以達到的實驗速度和性能。
HORIBA Jobin Yvon 的變革:快速MF2技術…
圖1 從八種頻率(淡藍)混合的激發光束中得出的熒光信號(紅色)。新的MF2利用這種激發方法在10毫秒內對熒光壽命進行表征。
MF2把速度和精密度聯合起來用于實時動力學檢測熒光壽命…
圖2 在9-CA的甲醇溶液中加入POPOP以后相角(左)和調制(右)的改變。注意當POPOP加入的時候相角是如何降低的,而此時調制卻在增長。
一個實際的例子如下:9-氰基蒽(τ = 11.8 ns)的甲醇溶液被放置在池子里,使用四種頻率混合的340nm的光來激發。超過十秒的熒光響應通過一個長程的Schoot KV 濾光片被記錄下來(λ > 370 nm)。注意在甲醇中加入POPOP(τ = 1.32 ns)以后相角和調制的變化。時間分辨率為50ms每個數據集,這對混合物可以更清楚的認識。兩種壽命且比例為50:50的混合物伴隨而來的是一個在響應上的改變。
MF2利用了我們簡單和強大的FluorEssence™軟件,通過單窗口來建立整個光譜實驗(圖3)。與選擇頻率來運行實驗不同,MF2帶來一個全新的范例:你決定壽命可能的范圍以后,軟件會為你選擇頻率。
圖3 FluorEssence™軟件來運行的一個MF2壽命動力學實驗的簡單設置。