六胺銀染色實驗代測
六胺銀染色簡介:
六胺銀染色是一種經典顯示基底膜的方法。經過改良之后,組織經鉻酸氧化,使真菌內的黏多糖暴露出醛基,醛基把六胺銀還原為黑色的金屬銀。氯化金可使金屬銀轉變為更穩定的金屬金,同時使背景更清晰。海波可以固定并洗去未還原的銀離子。
六胺銀染色實驗步驟(僅供參考):
1、六胺銀固定于甲醛固定液中,常規脫水包埋。切片4微米,脫蠟至水洗。
2、切片入氧化劑氧化20分鐘。流水稍洗。
3、入漂白液處理1分鐘,以除去氧化劑。
4、流水沖洗5分鐘,蒸餾水浸洗2次,每次30秒至60秒。
5、切片放入配制好的預熱至60度的六胺銀工作液中,加蓋60度恒溫染色大約20至60分鐘,切片呈淡黃色即取出經水洗后顯微鏡觀察是否有菌體出現。如有淡棕色菌體出現,應每隔5到10分鐘觀察一次以控制菌體著色深淺,直至顯色理想;
6、入蒸餾水中清洗。
7、用氯化金溶液調色1到2分鐘。蒸餾水洗1到2分鐘。
8、置于海波溶液2分鐘。流水沖洗5分鐘。
9、滴加橙黃G一小滴復染1秒即用水沖洗。染色時間不能過長,否則將影響最終效果。
10、流水沖洗20秒-60秒。
11、常規脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。染色完成。
染色結果:真菌黑色,背景淺紅色
六胺銀染色實驗代測