熒光素標(biāo)記造血細(xì)胞磷酸酶抗體IgG ,很多免疫學(xué)技術(shù)依賴于標(biāo)記抗體的使用。對抗體進行標(biāo)記主要是用于抗原的定位分析,在某些情況下,也可以對混雜有大量其他分子的樣本中的抗原進行定量檢測。由于抗體與其相應(yīng)抗原具有很高的親和力,因此帶有易識別標(biāo)記物的抗體可以定位分析抗原,并且是一種理想的快速價廉的定量測定方法。需要使用標(biāo)記抗體的三種方法,即免疫染色法、免疫印跡法和免疫分析。
熒光素標(biāo)記造血細(xì)胞磷酸酶抗體IgG ,此三種方法均能定位復(fù)雜混合物中的抗原,而且通過適當(dāng)?shù)膶φ找材芏繙y定。就免疫染色法而言,其目的就是定位正常細(xì)胞環(huán)境中出現(xiàn)的抗原。在此背景下,所有抗原均暴露于抗體,而抗體只和相應(yīng)的抗原結(jié)合,標(biāo)記后的抗體則能夠準(zhǔn)確定位抗原。免疫印跡法是將復(fù)雜的蛋白混合物經(jīng)過變性和凝膠電泳分離后,轉(zhuǎn)移至膜上,然后利用標(biāo)記抗體即能從一系列蛋白區(qū)帶中檢出所要研究的抗原。免疫分析則是利用各種方法顯示或捕獲抗原,然后用標(biāo)記抗體進行定位和定量分析。上述技術(shù)均依賴于標(biāo)記抗體來定位抗原。
,當(dāng)準(zhǔn)備采用這些方法時,首先應(yīng)確定利用直接法還是間接法來定位抗原以及選用何砷標(biāo)記物該項技術(shù)的要求。下面將討論這兩個問題。
檢測技術(shù)可分為兩大類即直接法和間接法。直接法是將抗體經(jīng)過純化,再用一種易于識別的示蹤劑標(biāo)記,然后使其直接與抗原結(jié)合,通過檢測抗體上的標(biāo)記物來測定相應(yīng)抗原。在間接法中,抗體既不用標(biāo)記也無須純化,當(dāng)其與抗原結(jié)合后經(jīng)過洗滌除去未結(jié)合的抗體,再通過二級試劑如標(biāo)記的抗免疫球蛋白抗體或蛋白A、蛋白G等來檢測抗原抗體復(fù)合物。在上述過程中,與抗原結(jié)合的抗體稱為*抗體(簡稱一抗),當(dāng)其用于直接法時經(jīng)過標(biāo)記,而在間接法中則未標(biāo)記;與一抗結(jié)合的抗體稱為第二抗體(簡稱二抗),在間接法中常被標(biāo)記。
直接與間接檢測法
直接法或間接法的選用取決于實驗條件。在直接檢測法中應(yīng)用標(biāo)記的一抗可減少操作步驟,且不易出現(xiàn)背景問題,但敏感性低于間接法,而且所用的每一種抗體都必須分別進行標(biāo)記。反之,間接法敏感性高、標(biāo)記物的應(yīng)用范圍廣,且一抗未經(jīng)標(biāo)記,故可避免其活性下降。因此,多數(shù)情況下用間接法。
直接法和間接法的選用
檢測方法
直接法
間接法
標(biāo)記位置
標(biāo)記一抗
標(biāo)記二抗
優(yōu)點
檢測步驟較少,背景低
敏感性高,標(biāo)記物應(yīng)用范圍廣、一抗無需標(biāo)記,較易掌握
缺點
敏感性偏低,每一種抗體均需分別標(biāo)記較難掌握
背景較高
YSF-2720R熒光素標(biāo)記抗磷酸化蛋白激酶B抗體IgGAnti-phospho-Akt/FITC
YSGA-0719R膠體金標(biāo)記癌胚抗原抗體IgGAnti-CEA/Gold
YSF-2406R熒光素標(biāo)記醛縮酶A抗體IgGAnti-AldolaseA/FITC
YSF-0097R熒光素標(biāo)記間變型淋巴瘤激酶抗體IgGAnti-ALK/CD246Ag/FITC
YSF-3047R熒光素標(biāo)記兔抗人、大鼠磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體IgGAnti-phospho-ALK/CD246(Tyr1586)/FITC
YSF-3021R熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體IgGAnti-ALK/CD246(phosphoTyr1278/1282/1283)/FITC
YSF-3022R熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體IgGAnti-ALK/CD246(phosphoTyr1604)/FITC
YSF-1576R熒光素標(biāo)記肝再生增強因子抗體IgGAnti-ALR/FITC
YSF-2532R熒光素標(biāo)記谷*氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體IgGAnti-ALT1/GPT1/FITC
YSF-0840R熒光素標(biāo)記α-甲基酰基*消旋酶抗體IgGAnti-AMACR/P504S/FITC
YSF-3653R熒光素標(biāo)記短鏈L-3羥烷基*脫氫酶抗體(人)IgGAnti-HADHSC(human)/FITC
YSF-3661R mouse)/FITCAnti-HADHSC(rat
YSF-2409R熒光素標(biāo)記神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體IgGAnti-Amph/FITC
YSF-1115R熒光素標(biāo)記腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體IgGAnti-AMPKalpha-1/FITC
YSF-2771R熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體IgGAnti-AMPKalpha2/FITC
YSF-3025R熒光素標(biāo)記磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體IgGAnti-AMPKalpha-1(phosphoSer485+Ser491)/FITC
YSF-3026R熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體IgGAnti-AMPKbeta-1(phosphoSer108)/FITC
YSF-3027R熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體IgGAnti-AMPKbeta-1(phosphoSer182)/FITC
YSF-1116R熒光素標(biāo)記腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體IgGAnti-AMPKBeta1/FITC
YSF-0057R熒光素標(biāo)記兔抗糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體IgGAnti-Amylin/FITC
YSF-0587R熒光素標(biāo)記血管緊張素II抗體IgGAnti-Ang-II/FITC
YSF-0677R熒光素標(biāo)記血管生成素-2抗體IgGAnti-ANG-2/FITC
YSF-2415R熒光素標(biāo)記錨定蛋白G抗體IgGAnti-AnkyrinG/ANK-3/ankyrin3/FITC
YSF-0800R熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗體IgGAnti-ANGPTL1/ANG-1/FITC
YSF-0537R熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣2/血管生成素樣蛋白-2抗體IgGAnti-ANGPTL2/ANG-2/FITC
YSF-1087R熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣4/血管生成素樣蛋白-4抗體IgGAnti-ANGPTL4/ANG-4/FITC
YSF-1171R熒光素標(biāo)記人、大、小鼠膜粘連蛋白 I抗體IgGAnti-AnnexinI/FITC
YSF-0576R熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白-2抗體IgGAnti-AnnexinII/FITC
YSF-1631R熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 Ⅲ抗體IgGAnti-AnnexinIII/FITC
YSF-1564R熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 Ⅳ抗體IgGAnti-AnnexinIV/FITC
YSF-0398R異硫氰酸熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、牛Annexin V抗體IgGAnti-AnnexinV/FITC
YSF-0450R熒光素標(biāo)記重組膜粘連蛋白-5(人)抗體IgGAnti-AnnexinV/FITC
YSF-1471R熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 VI抗體IgGAnti-AnnexinVI/FITC
YSF-0632R熒光素標(biāo)記按蚊抗體IgGAnti-Anophelesstephensiprotein1/FITC
YSF-2040R熒光素標(biāo)記抗心鈉肽(心鈉素)抗體IgGAnti-ANP/FITC
YSF-0934R熒光素標(biāo)記炭疽菌抗體IgGAnti-Anthrax/FITC
YSF-0935R熒光素標(biāo)記炭疽菌抗體(采用活疫苗制備)IgGAnti-Anthrax/FITC
YSF-1562R熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白A1抗體IgGAnti-ANXA1(AnnexinA1)/FITC
YSF-1535R熒光素標(biāo)記抗堿性磷酸酶抗體IgGAnti-AP/ALP/FITC
YSF-1546R熒光素標(biāo)記銜接蛋白β抗體IgGAnti-betaAdaptin/AP2/FITC
YSF-1600R熒光素標(biāo)記銜接蛋白γ抗體IgGAnti-Gamma-Adaptin/FITC
YSF-3569R熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α抗體IgGAnti-AP2alpha/FITC
YSF-1228R熒光素標(biāo)記銜接蛋白1抗體IgGAnti-alphaAdaptin/FITC
YSF-0058R熒光素標(biāo)記凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端)IgGAnti-Apaf-1/FITC
YSF-0059R熒光素標(biāo)記凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)IgGAnti-Apaf-1/FITC
YSF-0040R熒光素標(biāo)記APC活化蛋白C抗體IgGAnti-ProteinC/FITC
YSF-1565R熒光素標(biāo)記腺瘤息肉調(diào)節(jié)蛋白抗體IgGAnti-APCDD1/FITC
YSF-2425R熒光素標(biāo)記脂肪炎癥因子Apelin抗體IgGAnti-Apelin/FITC
YSF-2430R熒光素標(biāo)記Apelin receptor抗體IgGAnti-Apelinreceptor/APJreceptor/FITC
YSF-1406R熒光素標(biāo)記氧化還原因子1抗體IgGAnti-APEX1/Ref-1/FITC
當(dāng)使用標(biāo)記二抗時,無須自己制備標(biāo)記反應(yīng)試劑,可從許多廠商購買。有關(guān)試劑可大批量制備并經(jīng)過檢定,經(jīng)濟實用。因此只要有可能,*使用間接法和商品化試劑。
有時,必須使用直接標(biāo)記的抗體。zui常見的情況是共定位研究,即需要在同一細(xì)胞或組織標(biāo)本中定位分析兩種或多種抗原。在這種情況下,每一抗體都需經(jīng)過純化并標(biāo)記不同的示蹤物,以便對相應(yīng)抗原的位置做出對比。此外,當(dāng)背景因素影響結(jié)果時,使用標(biāo)記的一抗是行之有效的方法。zui后,在免疫分析中,必須使用標(biāo)記的一抗才能得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。