流式細胞術檢測技術服務
1、檢測項目：
（1）細胞周期細胞 （2）細胞凋亡 （3）免疫細胞分型 （4）表面抗原鑒定 （5）細胞內鈣離子檢測 （6）線粒體功能 （7）細胞分選
2、樣本及來源：
1） 單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2） 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
說明：
1、 實驗所用的流式細胞儀為COULTER EPICS XL。
2、 送檢樣本量：
1）、單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2）、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、 用戶需要進行流式細胞儀檢測時須提前預約，同時說明實驗目的、方法等。一次送檢標本數不少于10個。如果一次送檢標本總數不足10個，每個測試費用為標準收費×2。
4、 我公司在正式接受實驗委托一周內交付實驗結果。所提供實驗結果忠實于樣本的實際情況。
5、 用戶須一次性全額預付實驗費。
6、 部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供，；特殊標記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應可與樣本發生特異性識別反應。
7、 由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負責。
8、 請在表中說明檢測具體要求（可另附頁），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負責。
9、 請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負責保存。
客戶提供：
（1）標本:組織、細胞、全血（抗凝）
（2）抗體（熒光素標記）
PEzui強，適用于弱表達抗原
FITC*，適用于強表達抗原，適用范圍廣
biotin-avidin不適合 弱抗原的檢測
（3）其他試劑（如Fluo-3）
（4）染色試劑盒
附：流式細胞術檢測樣品*制備方法：
A. 直接標記抗體（FITC標記抗體）：
（1） 、收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
（2） 、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞，800rpm離心5min。
（3） 、用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體（5×105個細胞/20ul抗體）的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測即可。
（4） 、用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
B. 未標記抗體間接免疫熒光標記法：
（1）、收集2×106個細胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次，800rpm離心5min。
（2）、用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細胞，800rpm離心5min；
（3）、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
（4）、加入飽和劑量未標記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細胞，800rpm離心5min，洗去未結合一抗，重復一次。
（5）、加入熒光標記（FITC）標記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
（6）、加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞；固定待測。
（7）、流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
C.細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
（1）、待測樣本制成單細胞懸液，然后2000轉/分離心5分鐘，棄上清。
（2）、用4℃預冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。
（3）、調整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
（4）、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
注：本方法僅供參考，如有其它要求，請在送樣前說明。
| 服務項目 | 樣品外理 | 應用的試劑 | 收費 |
| 細胞周期細胞 | 細胞——*消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定過夜 （不超過一周） | RNA酶，PI 染料 | <10個樣品，80元/個 >10個樣品，60元/個 試劑費已包括。 |
| 細胞凋亡 | 新鮮培養的細胞 | Annexin V-FITC 細胞凋亡檢測試劑盒 | <10個樣品，150元/樣品 >10個樣品，120元/樣品 已包括試劑費用，客戶提供試劑可減20元另需細胞培養費用。 |
| 免疫細胞分型 | 培養的細胞：如白血病細胞，客戶刺激好的細胞、抗凝全血、脾勻漿 | 破膜劑，固定劑，刺激劑、特異性抗體（需客戶提供） | 雙染： <10個樣品，120元/樣品 >10個樣品，100元/樣品 三染：在原來基礎上加30元 需要分離細胞、培養、刺激的具體情況另記 |
| 表面抗原鑒定 | 培養的細胞 | 特異性抗體（需客戶提供） | 單染： <10個樣品，80元/樣品 >10個樣品，60元/樣品 雙染：在原來基礎上加30元 三染：在原來基礎上加30元 |
| 細胞內鈣離子檢測 | 培養的細胞 | Fluo-3 AM（鈣離子熒光探針） | <10個樣品，100元/樣 >10個樣品，80元/樣品 （已包含試劑） |
| 線粒體功能 | 僅適用于懸浮或貼壁培養的新鮮細胞 | 客戶提供試劑盒 | 檢測費可同細胞周期 |
| 細胞分選 | 收費：標記費用+分選儀使用費用 價格體系類似于共聚焦 |
