Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

商品介紹：

AlamaBlue 細胞活力檢測試劑盒提供了一種可靠、靈敏、安全和低成本的快速有效檢測細胞活力與毒性的方法。AlamaBlue 通過在細胞生長的培養基中所產生的化學還原反應，將非熒光信號的染料轉換成為一紅色熒光物質，試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），從而檢測細胞的存活率。維持細胞生產需要還原性環境而抑制生長則表現為氧化型環境。細胞生長率相關的降低可表現為氧化還原指示劑從氧化型（非熒光素、紫色）轉為還原型（熒光素、紅色）。該熒光信號可以用530~560nm 的激發波激發，在590nm 處可以獲發射波，檢測570 和600nm 的的吸光度值，校正監測值，可以減去相應的570nm 和600nm 的背景吸光度值。檢測所產生的熒光信號是與樣品中的活細胞數成正比的。

商品屬性：

AlamaBlue 細胞活性檢測試劑盒的靈敏度相似于[3H]胸苷法檢測細胞增殖法。根據不同類型的細胞，AlamaBlue 可以檢測到至少40個細胞，同時保證很好的重現性和靈敏度。作為試鹵靈（紫紅、紅色熒光）可以進一步被還原為水解化的試鹵靈（無色、無熒光），當細胞數量增多，所有的刃天青（7-羥基-3-羰基-10-氧化-三氫吩惡嗪）被轉換為試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），試劑盒的信號反而會發生衰減。因此，對于您所用的試劑盒來說，針對不同的細胞類型，應該調整您的細胞數，做相應的優化，才能得到更好的結果。

操作說明

以下操作可用作通用指導建議。考慮不同細胞類型與培養條件的差異性，有必要根據實際情況優化您的操作步驟。

1. 96 孔細胞培養板每孔100μL 培養基飼養細胞，控制細胞數目在40~10000 個/貼壁細胞，2000~500000 個/懸浮細胞。設置空培養基做對照。

2. 加入10μL AlamaBlue 溶液至培養基中，37 度孵育：24 小時（比色法讀數）；5-6 小時（熒光讀數）。

3. 檢測570nm 和600nm 的吸光度，或者用熒光微孔板讀數530nm 激發，590nm 發射波讀數。

4. 如果采用比色法檢測，選擇OD570-OD600 檢測，如果檢測熒光信號，請在校正OD 值后，先設置標準曲線，選擇合適您實驗的細胞濃度。

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融”，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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