在 1 × TBE 中分別用 GelRed 和 EB 預(yù)制 1% 瓊脂糖凝膠中 1Kb Plus DNA Ladder 稀釋物的電泳圖。從左至右各泳道 DNA 總量分別為 : 200 ng ， 100 ng ， 50 ng and 25 ng 。凝膠用 300nm 透視器顯像，用 EB 濾光片和 Polaroid 667 黑白膠片拍照
美國(guó)BIOTIUM公司技術(shù)專家研發(fā)，由南京森貝伽生物提供的1 KB DNA Ladder (100ng/uL)說(shuō)明書是種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過(guò)美國(guó)*安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。(下載美國(guó)Litron Laboratories, Inc. 完整安全檢測(cè)報(bào)告）
Table A. 訂貨信息
Cat# | Product Name | Unit Size | 品 牌 |
41001 | GelRedTM?Nucleic Acid Gel Stain, 3X in water | 4.0 L | Biotium |
41002 | GelRedTM?Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO | 0.5 mL | Biotium |
41003 | GelRedTM?Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in water | 0.5 mL | Biotium |
41003-1 | GelRedTM?10,000X solution in water, bulk pack | 10 mL | Biotium |
41004 | GelGreenTM?Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO | 0.5 mL | Biotium |
41005 | GelGreenTM Nucleic Acid Gel Stain,10,000X in water | 0.5mL | Biotium |
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目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料（凝膠染色試劑）總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不*令人滿意。例如，雖然 EB (溴化乙啶）作為目前使用zui廣泛的核酸凝膠染色試劑，能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì)。而且EB染色后具有較高的背景熒光信號(hào)（如圖1）。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為zui靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認(rèn)為是市場(chǎng)上較為安全的核酸染料 ，但它的染色效果還遠(yuǎn)不及 SYBR Green I 。
至于國(guó)內(nèi)有公司宣稱的新產(chǎn)品Goldview，我們不想多加評(píng)論。因?yàn)閺臉O為相似的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，該產(chǎn)品似乎就是AO（丫啶橙 ，一種劇毒產(chǎn)品，且熒光亮度不佳）。請(qǐng)看Goldview 與 AO 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果（其中Goldview是從國(guó)內(nèi)某公司采購(gòu)，AO則來(lái)自SIGMA，報(bào)告來(lái)自開放生物）
Biotium公司的1 KB DNA Ladder (100ng/uL)說(shuō)明書無(wú)論用于預(yù)制凝膠染色還是凝膠電泳后染色，都表現(xiàn)出了*的靈敏度。為配合 312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的 GelRed ，在使用了我們新開發(fā)的具有的試驗(yàn)步驟后（該試驗(yàn)步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液），在凝膠電泳后染色中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同， GelRed 在預(yù)制凝膠中使用時(shí)仍然有*的靈敏度，事實(shí)上GelRed 在檢測(cè)低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度，尤其對(duì)小分子量的 DNA 檢測(cè)非常靈敏（圖1）。 GelGreen 可以滿足使用 488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見光激發(fā)的 Dark Reader 的研究人員的使用要求。 GelGreen 無(wú)論是在預(yù)制凝膠還是凝膠電泳后染色中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng)，但不存在后者的不穩(wěn)定性問(wèn)題。實(shí)際上， GelRed 和 GelGreen ，特別是 GelRed 非常穩(wěn)定，可以*在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時(shí)甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備，*保存。
同樣重要的是，1 KB DNA Ladder (100ng/uL)說(shuō)明書相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司（ Litron Laboratories, Inc. ）進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測(cè)試結(jié)果表明， 在 18.5 μ g /mL （該濃度遠(yuǎn)高于*用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）濃度下， GelGreen 沒(méi)有誘變性，而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時(shí)有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。如圖3。相反， SYBR Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線粒體和核 DNA 染色，這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入。由于已知 SYBR Green I 對(duì)紫外線導(dǎo)致的突變有強(qiáng)烈的增強(qiáng)作用（ Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001) ），因此它的高細(xì)胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時(shí)成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。
特性:
gelred 高靈敏度
1 KB DNA Ladder (100ng/uL)說(shuō)明書是目前市場(chǎng)中zui靈敏的凝膠核酸染料
gelred 穩(wěn)定性*
可以使用微波爐加熱，可以在室溫下保存
gelred 更安全
艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于 溴化乙錠 （ EB ）
gelred 廣泛的適應(yīng)性
適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色
gelred 染色過(guò)程簡(jiǎn)單
與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中不必?fù)?dān)心染料降解；而電泳后染色過(guò)程也只需 30 分鐘且無(wú)需脫色或沖洗
gelred 對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響極小
對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I
gelred 與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置*兼容
使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí)， GelRed 可以*的替代 EB ；使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí)， GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料（見圖 4 中的光譜圖）
安全性測(cè)試 | ||||
SYBR Dyes | GelRed | GelGreen | ||
A) 5 min. incubation |
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| 要想讓DNA染色劑安全，*的辦法就是設(shè)法不讓其穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，Biotium 做到了！ |
B) 30 min incubation |
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圖 3. 在37°C下，分別使用1X SYBR Green I, SYBR Safe, GelRed and GelGreen 對(duì)HeLa 細(xì)胞進(jìn)行孵化，并分別在5分鐘（A)和30分鐘（B）后觀察。實(shí)驗(yàn)顯示SYBR染料迅速進(jìn)入細(xì)胞并將細(xì)胞內(nèi)的核酸染成亮綠色（以上僅圖示 SYBR Green 1），而 GelRed 和 GelGreen 則因?yàn)椴荒艽┩讣?xì)胞膜而*沒(méi)有進(jìn)入細(xì)胞內(nèi), 足以證明GelRed和GelGreen是安全的。
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圖 4. GelGreen （綠色） GelRed （紅色）在 PBS 緩沖溶液中結(jié)合 dsDNA 后的激發(fā)和發(fā)射光譜。 |
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圖 5. 室溫下， GelRed TM （ 500 nm ）和 SYBR Gold （ 488 nm ）稀釋在 1 × TBE 凝膠染色液中測(cè)得的吸光度隨時(shí)間變化圖。 GelRed 和 SYBR Gold 初始的吸光度值分別為 0.029 和 0.051 。 |
Table B.以下標(biāo)簽可以*地配合以上產(chǎn)品使用：
Cat# | Product Name | Unit Size | 品 牌 |
31021 | 1 KB DNA Ladder (100ng/uL) | 30 ug/300 ul | Biotium |
31022 | Ready-to-Use 1 KB DNA Ladder | 150 applications (1.5 ml) | Biotium |
** 一次購(gòu)買5個(gè)包裝以上可獲得更優(yōu)惠價(jià)格，立刻我們的。 |
鄭重聲明：
凡是市場(chǎng)上聲稱具有與Gelred和Gelgreen相同特性的 EB 替代品，且不指明是 Biotium 公司品牌的核酸染料，經(jīng)檢驗(yàn)都是通過(guò)Gelred或 Gelgreen稀釋后重新包裝的水貨，染色質(zhì)量遠(yuǎn)不及Biotium原包裝產(chǎn)品。我們鄙視這種損害客戶利益的行為，并堅(jiān)決打擊，發(fā)現(xiàn)一次我們將不再向其供貨！ 在此，我們呼吁用戶在購(gòu)買Biotium公司產(chǎn)品時(shí)， 請(qǐng)選擇正規(guī)經(jīng)銷商。
