產(chǎn)品說明:本產(chǎn)品是94 kDa的耐熱性DNA聚合酶及配合其使用的10×PCR Buffer以及6×Loading Buffer。是將改良后的 DNA Polymerase的基因經(jīng)過克隆轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后,分離純化而得到的性狀優(yōu)良,功能強(qiáng)大的DNA聚合酶。它比天然Taq DNA聚合酶有更加強(qiáng)大的功能以及更加高質(zhì)量的活性。使用本產(chǎn)品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物的3′端會進(jìn) 行加“理,因此,PCR產(chǎn)物可直接用于T載體的酶連中。
活性定義:一個單位(U)的DNA聚合酶的活性定義為在74℃,30分鐘內(nèi),以活性化的大馬哈魚DNA作為模板/引物,攝入10nmol的全核苷酸所需的酶量。
質(zhì)量控制: SDS-PAGE檢測純度大于99%;經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘留DNA;能有效擴(kuò)增人類基因組中的單拷貝基因;室溫放置一周,活性無明顯改變。
適用范圍:增、DNA標(biāo)記、DNA序列測定。
建議的PCR反應(yīng)體系:(以50μl反應(yīng)體系為例)
PD6201-100T Taq DNA polymerase|北京現(xiàn)貨 (擴(kuò)增速度快,性能穩(wěn)定,較好的保真性,用量可酌情增減,較實(shí)惠。)
模板DNA(2.5ng-100ng) | 1μl |
Forward Primer (10 μM) | 2μl |
Reverse Primer (10 μM) | 2μl |
dNTP (10 mM ) | 1μl |
Taq DNA polymerase | 4μl |
10×PCR Buffer | 5μl |
ddH2O | 補(bǔ)足到50μl |
50 μl PCR反應(yīng)體系中模板DNA*使用量
大腸桿菌基因組DNA | 10 ng~100 ng |
λDNA | 0.5 ng~5 ng |
質(zhì)粒DNA | 0.1 ng~10 ng |
建議的PCR反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時間 | |
預(yù)變性 | 95℃ | 3 min | |
變性 | 95℃ | 30 sec | 25-35 cycles |
退火 | 50-70℃ | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 0.5-5min(0.5min/kb) | |
終延伸 | 72℃ | 5min | |
保溫 | 4/16℃ | --- |
PD6201-100T Taq DNA polymerase|北京現(xiàn)貨 注意事項(xiàng):
1、 本產(chǎn)品提供的酶量可進(jìn)行多次反應(yīng),配置過程應(yīng)將酶盡量放在-20℃冰盒中。
2、PCR的反應(yīng)液請?jiān)诒吓渲疲缓笾糜赑CR擴(kuò)增儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動法(Cool Start Method)可增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性,減少PCR過程中的非特異性反應(yīng),能得到良好的PCR結(jié)果。
3、 PCR反應(yīng)后,加入本產(chǎn)品提供的6×Loading Buffer按5:1混合均勻后加入凝膠孔進(jìn)行電泳。