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ELISA試劑盒組成及試劑配制

1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為1,600 pg/ml，將其稀釋為400 pg/ml后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別稀釋成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制200 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 400 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3. 樣品稀釋液：1×20ml。

4. 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。

5. 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。

6. 檢測(cè)溶液A：1×120μl（1:100）臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（100μl/孔），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測(cè)溶液A加990μl檢測(cè)稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。

7. 檢測(cè)溶液B：1×120μl/瓶（1:100）臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。

8. 底物溶液：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

11. 覆膜：5張

12. 使用說明書：1份

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（建議參考儀器使用說明提前預(yù)熱）

2. 微量加液器及吸頭，EP管

3. 蒸餾水或去離子水，全新濾紙

注意事項(xiàng)：

1.       試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.       濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.       各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。

4.       請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5.       封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.       底物請(qǐng)避光保存。

7.       嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.       所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.       本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

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