二、真菌DNA的提取（方法二）
1.真菌菌絲0.5-1g，在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3mL 65℃預(yù)熱的DNA提取緩沖液，快速振蕩混勻65℃水浴30min，期間混勻2-3次
3.加入1mL 5M KAc，冰浴20min
4.氯仿:異戊醇（24:1）抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）
5.取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇，混勻，靜置約30 min
6.用毛細(xì)玻棒挑出絮狀沉淀，用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次，再用無水乙醇漂洗1次，吹干，重懸于500ul TE中
7.加入1ul RNaseA（10mg/mL），37℃處理1h
8.用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇（25:24:1）和氯仿:異戊醇（24:1）各抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）
9.取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V體積的無水乙醇，-70℃沉淀30min以上
10.沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干，溶于200ul TE中，-20℃保存?zhèn)溆?/div>
DNA提取緩沖液：100mM Tris-HCl（pH8.0），20mM EDTA（pH8.0），1.5M NaCl，2% CTAB（W/V），4% PVP40（W/V）和2%巰基乙醇（V/V），PVP和巰基乙醇使用前加入5M KAc
方法一和二，是大同小異。主要是DNA提取液配方不一樣！成本也不一樣！
三、真菌菌絲的總RNA的提取
1.實驗試劑
（1）RNA提取緩沖液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC處理的水配置），25mM EDTA，0.5g/L 亞精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巰基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高溫滅菌條件下，Tris-HCl要和DEPC發(fā)生反應(yīng)，所以配RNA提取緩沖液時直接用DEPC處理的水配制即可
（2）SSTE：1 M NaCl，0.5% SDS（W/V），10mM Tris-HCl pH8.0，1.0mM EDTA
（3）10M LiCl 直接用蒸餾水配10M LiCl，加1‰的DEPC過夜后，高溫滅菌
（4）3M NaAc
（5）氯仿:異戊醇（24:1）
（6）酚（pH4.5）:氯仿:異戊醇（25:24:1）
（7）DEPC處理水 用1‰的DEPC處理蒸餾水過夜，高溫滅菌
（8）無水乙醇；70%酒精
2.實驗步驟
（1）實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱，離心管中加入ME（巰基乙醇），（10mL加80ul，50mL中加入300ul）
（2）取約0.8g菌絲體（液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了），在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末，裝入50mL離心管，按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液，顛倒混勻
（3）65℃水浴3-10 min，期間混勻2-3次
（4）加入等體積的酚（注意是酸酚pH4.5）:氯仿:異戊醇（25:24:1）抽提（10,000rpm，4℃，5 min）
（5）取上清，等體積的氯仿:異戊醇（24:1）抽提（10,000rpm，4℃，5 min）
（6）加入1/4V體積10M LiCl溶液，4℃放置6h以上（或過夜）
（7）10,000rpm，4℃離心20min
（8）棄上清，用500ul SSTE溶解沉淀
（9）酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）抽提兩次，氯仿:異戊醇（24:1）抽提1次（10,000rpm，4℃，5min）
（10）加2V體積的無水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30min以上
（11）12,000rpm，4℃離心20 min
（12）棄上清。沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
（13）加200ul的DEPC處理水溶解
（14）用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
（在抽提過程中，若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多，可以增加抽提次數(shù)）
注意：提取RNA請盡量在低溫下操作，如果條件不容許，在室溫下操作的時間要盡可能的短。
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