1%戊*鈉,液氮,HE染色劑,4%多聚甲醛,二甲苯,蘇木素-伊紅,2.5%戊二醛,0.1mol/L磷酸緩沖液,1%餓酸,丙酮,環氧樹脂618,醋酸鈾,枸椽酸鉛
解剖顯微鏡,凍存管,光鏡,LKB超薄切片機,透射電鏡(transmission electron- microscope,TEM)
成年雄性SD大鼠
1. 成年雄性SD大鼠50只,體重300 g左右。1%戊*鈉30 mg/kg,腹腔注射,頸推脫臼處死。
2. 摘除眼球,分離神經視網膜組織。
3. 解剖顯微鏡下沿角膜緣切開眼球,去除角膜、晶體和玻璃體,剝離神經視網膜組織,用預冷去離子水沖洗,濾紙吸干水分。置凍存管內,用做組織總蛋白提取。
4. 部分分離的神經視網膜組織,立即液氮凍存。7 um快速冰凍切片,HE染色,封片鏡檢。
5. 部分神經視網膜組織,立即用4%多聚甲醛固定24小時,常規石蠟包埋,4um連續切片,二甲苯脫蠟,蘇木素-伊紅染色,常規脫水,透明,封片,光鏡觀察。
6. 部分神經視網膜組織,立即用2.5%戊二醛4℃固定2小時,0.1mol/L磷酸緩沖液沖洗,1%餓酸后固定2小時,丙酮梯度脫水,環氧樹脂618包埋,LKB超薄切片機切片,電子染色、醋酸鈾、枸椽酸鉛各15 min。透射電鏡(transmission electron- microscope,TEM)觀察攝片。