上海哈靈生物專家對ELISA試劑盒的評價

ELISA試劑盒是一種十分常用的定性定量檢測方法，人體和動物、體外細胞培養中80％以上蛋白定量都使用其作為檢測的方法。ELISA試劑盒價格一般非常昂貴，但各家試劑公司的試劑盒質量卻魚龍混雜。ELISA試劑盒既有用于科研的，也有用于臨床診斷的。應用于臨床診斷的試劑盒必須通過衛生部門的許可，國家對用于臨床診斷的試劑盒有相當嚴格的規定和要求，并制定出了相關的規則來管理試劑盒的質量。

仔細閱讀說明書，對說明書的內容做一個詳細的了解。審查內容包括：

1. 試劑盒的名稱：ELISA試劑盒名稱一般由“（物種）＋（測定指標）＋酶聯免疫試劑盒（ELISA）”，物種和測定指標不能混淆，否則買錯了就是你的事情；另外有的試劑盒說明書試劑盒名稱明顯與寫在試劑盒上的名稱不符，這要引起你的警惕。

2. 用途：應用于科研還是臨床診斷，用于臨床診斷的要有衛生部的批準文號。

3. 測定原理：現在ELISA試劑盒除了是測定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，這種方法大多數用的是增強的雙抗體夾心法，即使用生物素-親和素系統，還有少數的指標可能使用競爭法，這類方法適用于半抗原的測定。具有復雜結構的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗。當然如果兩個都是單抗（這兩個單抗針對不同表位），那么測定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個用單抗，一個用多抗，測定的靈敏度會更好。某些簡單的化合物用ELISA測定時，因為沒有兩個或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競爭法測定。如果發現有測定簡單化合物（如雌激素、NO等）用雙抗體夾心法作測定原理時，這個試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區別。一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標本中抗原濃度的增加而提升至一定程度后，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應”（hook eHect），也就是我們在免疫沉淀試驗中所稱的“帶現象”（zone phenomenon）。所以當使用一步雙抗體夾心法時，樣品濃度太好，有時會出現測不出來的現象，此時要作適當的稀釋才能準確測定。

4. 試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的方法時，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，有鋁箔袋密封，打開后有干燥劑，實驗時暫未使用的酶標條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。而應用于科研的試劑盒，國家則沒有出臺相關的質量管理規定，因此試劑盒質量也就無法保障。在這種情況下，許多劣質的試劑盒在市場泛濫，不少同行為此浪費了大量的時間和金錢，卻沒有得到一個良好的實驗結果。給戰友們介紹一下如何判斷試劑盒的質量，選購好的試劑盒。

ELISA質量保證是一個復雜的過程，許多重要的環節都影響到檢測的質量：
一、操作因素對ELISA結果的影響
ELISA操作步驟復雜，操作不當會產生較大的誤差。
產生較大誤差的影響因素有：
1.加樣
2.溫育
3.洗滌
4.顯色
5.比色

二、灰區的設置通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來衡量結果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”（cut-off value，CO值），這是定性免疫測定結果報告的依據。

三、標本復查ELISA手工檢測過程復雜，影響因素較多，即使室內質控在控，也可能因孔間差異而造成結果的差異，因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結果進行復查。

四、結果判斷和報告常用下列幾種方法表示結果：
1.定性測定
2.半定量測定 結果一般以滴度表示。
3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標準曲線，結果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。
4.結果報告