293(HEK-293)人胚腎細胞購買細胞注意事項：

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們。

2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件*。若由于培養條件不*而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3.用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養過夜，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們

4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL維持細胞正常培養，待細胞匯合度 90%左右時正常傳代。

5.請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。

6.建議客戶收到細胞后前 3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態,便于和技術部溝通交流。

細胞名稱：293(HEK-293)人胚腎細胞
組織來源：腎；以腺病毒5 DNA 進行轉化
培養條件：DMEM +10% FBS；37℃，5% CO2
形    態：貼壁；上皮細胞樣
背    景：293細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞。 此細胞包含并表達轉染的Ad5基因。早期報道中指出該細胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側端和右側端的DNA，但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細胞染色體19q13.2。該細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主。可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。 需在生物安全2級實驗室操作。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1.取出細胞瓶,75%酒精消毒后拆下封口膜，放入37℃，5%CO2培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。

2.待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
 
3.細胞傳代：吸出細胞瓶中的培養基，用 PBS清洗細胞一次。

4.加入0.125%胰蛋白酶消化液約 1mL至培養瓶中，37℃消化   3min左右；顯微鏡下
觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化。

5.用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2或  1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的
*培養基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2細胞培養箱中培養。

6.待細胞*貼壁后，培養觀察，每隔 2-3天更換新鮮的*培養基。

由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

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