PK-1豬腎細(xì)胞系（STR鑒定）
英文名稱:Porcine Kidney Cell Line
1）來源：豬腎
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

詳細(xì)介紹

PK-1豬腎細(xì)胞系（STR鑒定）
英文名稱：Porcine Kidney Cell Line
規(guī)格：1*10 ⁶
細(xì)胞介紹
一、細(xì)胞特性
1）來源：豬腎
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細(xì)胞收到后處理
PK-1豬腎細(xì)胞系（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
視具體情況而定。

★ 注：如運(yùn)輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡，我們將無條件補(bǔ)發(fā) 收貨后十個(gè)工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價(jià)重發(fā)。

相關(guān)細(xì)胞系列表：

GC-2 spd；小鼠精母細(xì)胞系 1×10^6 cells/瓶

GC-1 spg?；小鼠精原細(xì)胞系 1×10^6 cells/瓶

CMT93(CMT-93) ；小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

STC-1 ；小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

C8-D1A(C8D1A) ；小鼠小腦星形細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

MH-S；小鼠肺泡巨噬細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

CTLL-2(CTLL2)；小鼠T淋巴細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

TC-1(TC1) ；小鼠肺上皮細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

MLO-Y4 ；小鼠骨樣細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

A20 ；小鼠B細(xì)胞淋巴瘤 1×10^6 cells/瓶

RENCA ；小鼠腎癌細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

RGC-5 ；小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

NCTC1469 (NCTC 1469)；小鼠正常肝細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

MLE-12(MLE 12 ) ；小鼠肺上皮細(xì)胞 1×10^6 cells/瓶

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱顯微鏡

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