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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間:2018-06-11 21:20:21瀏覽次數(shù):367次
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玻璃珠法柱式真菌DNAout真菌DNA提取是一個難題,一是因為真菌有菌絲體、孢子等多種*不同的結(jié)構(gòu)形態(tài),二是因為其細胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產(chǎn)品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產(chǎn)品,它利用 法破碎細胞,主要用于從真菌孢子和液體培養(yǎng)的真菌細胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAOUT采用液氮研磨法破碎細胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即
玻璃珠法柱式真菌DNAout
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
玻璃珠法柱式真菌DNAout | 50次 | 詢價 |
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真菌DNA提取是一個難題,一是因為真菌有菌絲體、孢子等多種*不同的結(jié)構(gòu)形態(tài),二是因為其細胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產(chǎn)品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產(chǎn)品,它利用 法破碎細胞,主要用于從真菌孢子和液體培養(yǎng)的真菌細胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAOUT采用液氮研磨法破碎細胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,提供包括玻璃珠、離心吸附柱在內(nèi)的所有試劑和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎細胞,屬于物理方法,遠比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學(xué)破壁法重復(fù)性好,也不容易帶入外源真菌DNA(注:文獻報道蝸牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染,用于提取真菌DNA往往會造成污染)。
3. 本方法提取一個樣品只需要10余分鐘,方便、快速和高效。
4. 一次可以處理5 mL的過夜真菌培養(yǎng)物,所得的基因組DNA OD260/OD280一般都在1.8左右,長度一般在20 Kb左右,每mL菌液的DNA產(chǎn)率一般在1-3 μg。可以直接用于PCR和酶切等后續(xù)試驗。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時,變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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