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上海聯邁生物工程有限公司
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線狀DNA清除劑分離純化環狀DNA(質粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA和某些病毒DNA)的時候經常需要去除其中的基因組DNA污染,否則會對后續的PCR、WGA和測序等反應產生干擾。而基因組DNA一般都十分巨大,無論是線狀(如真核細菌基因組DNA)還是環狀(如細菌DNA),經過常規的DNA純化過程都會變成20-50 Kb大小的線狀DNA,而上述環狀DNA一般還能保持環狀構型。根據這一特點,本公司
線狀DNA清除劑
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
線狀DNA清除劑 | 30次 | 詢價 |
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分離純化環狀DNA(質粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA和某些病毒DNA)的時候經常需要去除其中的基因組DNA污染,否則會對后續的PCR、WGA和測序等反應產生干擾。而基因組DNA一般都十分巨大,無論是線狀(如真核細菌基因組DNA)還是環狀(如細菌DNA),經過常規的DNA純化過程都會變成20-50 Kb大小的線狀DNA,而上述環狀DNA一般還能保持環狀構型。根據這一特點,本公司開發了專門用于去除線狀DNA的本產品,它有如下優點:
1. 即開即用,不需用戶花費大量時間去摸索各種條件。
2. 酶法去除線性DNA,使線狀DNA污染降級幾個數量級,不會干擾后續試驗。
3. 柱式法純化回收環狀DNA,能快速高效清除殘留酶,得到的DNA可直接使用。
4. 酶法處理不依賴于DNA序列,適于于任何線狀DNA。而內切酶去除線狀DNA則需要預先確知其在環狀DNA上沒有酶切位點。
5. 適用的環狀DNA包括質粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA、環狀病毒DNA等。
6. 得到的環狀DNA可用于多種后續試驗,尤其是WGA、PCR和測序等對污染敏感的試驗。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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