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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2020-10-26 20:23:52瀏覽次數(shù):113次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動(dòng),保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
小鼠胃粘膜組織提取物 | 詳見說明書 | XG-X7006 |
小鼠胃粘膜組織提取物【Mouse Gastric: Normal Gastric Mucosal Derivatives】
胃粘膜由許多胃單位構(gòu)成的,每個(gè)胃單位由頂細(xì)胞、壁細(xì)胞、主細(xì)胞、頸粘液細(xì)胞、多能干細(xì)胞以及少量的內(nèi)分等多種上皮細(xì)胞組成,其中頂細(xì)胞、壁細(xì)胞、主細(xì)胞是胃粘膜主要的三種細(xì)胞。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠胃粘膜組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠胃粘膜組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
Oxytetracycline hydrochloride表皮型脂氧合酶3抗體(魚鱗病相關(guān)蛋白)anti- MRPL11 antibodyC-肽(C-Peptide)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Tulobuterol hydrochloride錨蛋白重復(fù)域28抗體anti- MRPL12 antibody胰島素(INS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Palladium monoxide淋巴細(xì)胞相關(guān)AF4樣蛋白抗體anti- MRPL13 antibody胰島素(INS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Vanadyl acetylacetonate;Bis(2,4-pentanedionato)vanadiuM(IV)oxide;VanadiuMoxy acetylacetonate;VanadiuM(IV)oxide bis(2,4-pentanedio- nate);VanadiuM(IV)oxide acetylacetonate抑癌蛋白AIMP3抗體anti- MRPL14 antibody5(KLK5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Quinalphos相關(guān)蛋白AKAP抗體anti- MRPL15 antibody5(KLK5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
RHENIUM (VI) OXIDE蛋白激酶A錨定蛋白6抗體anti- MRPL19 antibody狀腺素(T4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Ruthenium(IV) oxide hydrate肺α/β水解酶蛋白1抗體anti- MRPL2 antibody5(KLK5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
CARYOPHYLLENE OXIDE水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體anti- MRPL21 antibodyP選擇素(SELP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
小鼠胃粘膜組織提取物Cryphonectria parasitica (Murrill) Barr, te ..神經(jīng)細(xì)胞蛋白Nav1抗體Human PVALB(Parvalbumin alpha) ELISA KitER脂質(zhì)Raft關(guān)聯(lián)蛋白2(ERLIN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..軸索過度生長(zhǎng)抑制因子B受體抗體Human DPP9(Dipeptidyl peptidase 9) ELISA Kit腫瘤關(guān)聯(lián)糖蛋白72(TAG72)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Polaribacter filamentus Gosink et al.神經(jīng)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體Human DUOX1(Dual oxidase 1) ELISA Kit含豐富重復(fù)蛋白3C(LRRC3C)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Homo sapiens, human胚胎神經(jīng)細(xì)胞NNAT抗體Human MAT2A(S-adenosylmethionine synthase isoform type-2) ELISA KitER脂質(zhì)Raft關(guān)聯(lián)蛋白1(ERLIN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Basidiobolus ranarum Eidam, teleomorph神經(jīng)肽Y受體5抗體Human AHCY(Adenosylhomocysteinase) ELISA Kit絲裂原激活蛋白激酶14(MAPK14)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Fusarium oxysporum f. sp.melonis Snyder ..神經(jīng)肽Y受體4抗體Human ERAP1(Endoplasmic reticulum aminopeptidase 1) ELISA Kit周期素依賴性激酶2(CDK2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..螺旋環(huán)螺旋蛋白1+2抗體Human PMP22(Peripheral myelin protein 22) ELISA Kit誘導(dǎo)蛋白(DEXI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Candida aglyptinia Suh et al.神經(jīng)肽W抗體Human IAA(Insulin Autoantibodies) ELISA Kit脂肪細(xì)胞膜關(guān)聯(lián)蛋白(APMAP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
收到細(xì)胞如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
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