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小鼠甲狀腺組織提取物【Thyroid: Normal Mouse Thyroid Derivatives】
小鼠甲狀腺位于頸部甲狀軟骨下方,氣管兩旁。甲狀腺的主要功能是合成甲狀腺激素,調節機體代謝。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠甲狀腺組織中高質量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠甲狀腺組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 小鼠甲狀腺組織提取物 |
規格 | 詳見說明書 |
貨號 | XG-X7023 |
培養步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
1-Chlorohexane拮抗凋亡轉錄因子抗體anti- MUTYH antibody抵抗素(RETN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
1-Heptyneα-1抗胰抗體anti- MVD antibody抵抗素(RETN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
1-Hexanethiol;Hexyl Mercaptan;n-Hexanethiol;Mercaptan C6;priM-n-Hexyl Mercaptanα-1抗抗體anti- MVK antibody抵抗素(RETN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
1-HexyneATP結合蛋白家族6抗體anti- MVP/LRP antibody多巴胺(DA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
1-Naphthoic acid;Naphthalene-1-carboxylic acid三酸腺苷結合盒亞家族G1抗體anti- MX1 antibody蛋白酶激活受體2(PAR2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
1-Naphthol-3,6-disulfonic acid disodiuM salt hydrate脂聯素受體2抗體anti- MX1 antibody胱天蛋白酶8(CASP8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
1-NitropropaneABL2蛋白抗體anti- MXD1 antibodyS100鈣結合蛋白A11(S100A11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
1-Nitroso-2-naphthol;1,2-Naphthoquinone-1-oxiMe;C.I. 10005血管緊張素轉換酶ACE1抗體anti- MXD1 antibodyS100鈣結合蛋白B(S100B)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
小鼠甲狀腺組織提取物Rhizoctonia solani Kuhn, anamorphNFkB誘導激酶抗體Human SORT1(Sortilin) ELISA Kit轉化生長因子β受體3試劑盒
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..神經激肽A受體/K物質受體抗體Human GPA33(Cell surface A33 antigen) ELISA Kit轉化生長因子β受體2試劑盒
Bordetella parapertussis (Eldering and Kend ..神經激肽B抗體Human SP1(Transcription factor Sp1) ELISA Kit轉化生長因子β受體1試劑盒
Nectria haematococca Berkeley et Broome, te ..神經粘蛋白抗體Human SPAST(Spastin) ELISA Kit轉化生長因子β刺激蛋白22試劑盒
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..神經束蛋白抗體Human SERPINB3(Serpin B3) ELISA Kit轉化生長因子β3試劑盒
Cryphonectria parasitica (Murrill) Barr, te ..高分子量神經絲蛋白抗體Human GGT1(Gamma-glutamyltranspeptidase 1) ELISA Kit轉化生長因子β2試劑盒
Schizosaccharomyces pombe Lindner細胞核因子/k基因結合核因子抗體Human CERK(Ceramide kinase) ELISA Kit轉化生長因子β1試劑盒
frozen低分子量神經絲蛋白抗體Human FCGRT(IgG receptor FcRn large subunit p51) ELISA Kit轉化生長因子α試劑盒
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