詳細介紹
1.科研beckman離心管平衡時,天平*使用而沒有進行校對,對稱放置的離心管不平衡并且超過了0.1~ 1g。
2.beckman離心機科研beckman離心管在裝樣時,因樣品液束裝滿或離心管帽沒有擰緊密封,在離心過程中離心腔內的高真空狀態(tài)造成離心管抽扁、破裂和樣品液外溢,造成轉子不平衡而發(fā)生軸彎曲或斷軸事故。
3.當原樣品的比重不等于配平液的比重時,轉子動平衡失調而發(fā)生事故。
4.使用水平轉子時,不細心將吊桶的序號與水平轉子主體的序號裝錯,影響轉子的動平衡。
5.鋁合金離心管帽與不銹鋼離心管帽混用(兩者比重不同)而發(fā)生事故。
6.離心管帽內橡膠密封環(huán)和轉子蓋橡膠密封環(huán)使用不當和消毒不當,如*使用內部斷裂和固高溫消毒r使用干燥箱烘烤)等處理而老化龜裂、失去密封作用等,使樣品在高速運轉時外溢,從而使轉子在不平衡狀態(tài)下運行。
7.對予各種材料的離心管,使用前沒能很好地了解廠家要求的離心管使用范圍和消毒方法,采用化學溶劑和不適當?shù)南疽禾幚恚斐呻x心管在運行中溶脹、破裂而發(fā)生事故。
8.由予工作中粗心大意,轉子蓋沒有擰緊或是將轉子蓋和轉子柄互換,造成螺扣不吻合,當開機運行時,轉子蓋拋出而發(fā)生嚴重的斷軸事故。
beckman離心機操作規(guī)程
1.臺式高速離心機的工作臺應平整堅固,工作間應整齊清潔,干燥并通風良好。
2.打開電源開關,批示燈亮。
3.關電源開關。
4.開啟離心蓋,將內腔及轉頭擦拭干凈。
5.裝放稱量一致的試管。
6.關閉離心蓋。
7.設定定時
8.打開電源開關
9.調節(jié)調速旋鈕置于所需轉速。
10.每次停機前。必須將調速旋鈕置于小位置。定時器置零。再關電源開關。
11.擦試內腔及轉頭。關閉離心蓋。
beckman高速離心機維護保養(yǎng)
1.離心蓋上不要放置任何物質,每次使用完畢,務必清理內腔和轉頭。
2.臺式高速離心機如較長時間未使用,在使用前應將離心機蓋開啟一段時間,干燥內腔。
3.電機的碳刷在使用3000小時后,應及時更換,以免磨損整流子。
4.臺式高速離心機經(jīng)*使用,磨損屬正常現(xiàn)象
制備型超高速離心機的幾種分離方法:
A.差速離心:逐次增加離心力,每次可沉降樣品溶液中的一些組份。
差速離心是一種常用的方法。在這種方法中,離心管在開始時裝滿了均一的樣品溶液。通過在一定速度下一定時間的離心后,就可得到兩個部份:沉淀和上清液。
通常在次離心時把大部分不需要的大粒子沉降去掉。這時所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速度離心,把所需的粒子沉積下來。離心的時間要選擇得當,使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。對于得到的沉淀和上清液可以進行進一步的離心,直到達到所需要的分離純度為止。
差速離心的特點是操作簡單,但分離純度不高。
B.密度梯度離心法:可以同時使樣品中幾個或全部組份分離,具有很好的分辨率。
(1)速率區(qū)帶法(ratezonal):
根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步驟如下:
在離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。
將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部。樣品在梯度溶液表面形成一負梯度。
由于不同大小的粒子在離心力作用下,在梯度中移動的速度不一樣,所以經(jīng)過離心后會形成幾條分開的樣品區(qū)帶。
注意:樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點的密度。離心過程必須在區(qū)帶到達管子底部前停止。
(2)等密度離心法(isopycnic):
根據(jù)粒子的不同密度來分離。離心過程中,粒子會移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶。
密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中。經(jīng)離心后,樣品粒子達到它們的平衡點。
注意:平衡后粒子的分離*由其密度決定,與時間無關,此時再改變離心轉速,只能改變區(qū)帶的相對位置。
密度梯度分析法
(1)梯度介質性質與選擇:
A、應具備的性質:
梯度物質的選擇原則是滿足分離方法的基本要求,一個理想的密度材料標準它應是:
所形成的溶液密度應包括所需要的密度范圍。
具有某些性質,如折射率,據(jù)此可測定它的濃度。
所形成的溶液粘度低。
不損傷所分離的樣品。
離心分離后容易除去。
不妨礙分離積分的分析。
B、常用介質種類:
表一、常用梯度材料在20℃密度
B.梯度介質應用范圍:
表二、等密度梯度介質的應用
表三、各種大分子在蔗糖梯度液中的大約密度
(2)、梯度溶液的準備:
計算,稀釋
(3)梯度形狀
梯度形狀分:線型、等速型、階梯型、平坦型、陡峭型指數(shù)梯度。
梯度形狀對于分離是否成功非常重要:
常用的是線型梯度,適用于分離蛋白質、酶、激素、核糖體亞基和一些植物病毒;等速型適用于分離脂蛋白和一些需上浮分離樣品;不連續(xù)或階梯型梯度適用于分離整細胞、亞細胞組分以及純化一些哺乳類動物病毒或昆蟲病毒。等速梯度以及長液柱可增進分離能力,適用于分離核糖體亞基、多核糖體及植物病毒。
B.梯度柱制備:
梯度液柱可以用手工或梯度儀制備
半注法:
為縮減離心時間,或分離樣品較少可用半注法:下半管鋪置梯度介質,中間加樣品,上面鋪Buffer或液體石臘油。
(4)加樣方法與加樣量:
將樣品加到梯度液柱上,針尖和離心管成45-60°角度,慢慢地將樣品沿管壁流到液面上去,對于DNA一類易斷的脆弱樣品,應該用孔徑較大的移液管代替針頭,以避免剪切力對樣品的切割作用。樣品濃度是梯度柱小密度的1/10(W/W)。
(5)轉子的選擇與效應:
(6)分離區(qū)帶的回收及檢測
離心后所形成的區(qū)帶樣品的回收方法基本有四種:
a.穿刺法
穿刺離心管底部,使梯度溶液滴出,將一具有合適閥門的蓋帽放在離心管頂,可控制滴出速度。
b.虹吸法:
將一毛細管輕輕插入管底,盡量防止梯度抖動,用微量泵逐漸滴取,以一定量滴數(shù)或體積部分收取。
c.加壓法:
通過一針管將高密度的液體泵入到梯度離心管的底部,部分收集換出的溶液。
d.切割法:
采用的切割刀切割所需區(qū)帶。
區(qū)帶檢測:
所謂區(qū)帶檢測,實際上是對水平轉子或角轉子和垂直轉子離心管中的分離物質所做的監(jiān)測,通常只是測量在260或280mm時長的吸收值,以決定梯度中的核酸或蛋白的整個分布,這個操作通常稱之為在線(online)監(jiān)測。