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玉米赤霉烯酮檢測試劑盒使用說明書
點擊次數：831 發布時間：2019-7-31
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料、食用油、啤酒、醬油等樣本中的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）（又稱F-2 毒素），試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣本溶液，樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗玉米赤霉烯酮抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量。
2 技術指標
2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)
2.2 反應模式：25℃，30min～15min
2.3 檢測下限：
谷物及配合飼料…………………6ppb
2.4 交叉反應率：
玉米赤霉烯酮……………………100%
玉米赤霉酮………………………13%
玉米赤霉醇………………………＜1%
2.5 樣本回收率：
谷物及配合飼料…………………90%±15%
3 試劑盒組成
酶標板……………………………96孔
標準液（黑蓋）：各1ml
0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb
高標準液：1ppm……………………1ml
酶標記物（紅蓋）…………………5.5ml
抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml
底物液A（白蓋）……………………6ml
底物液B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標儀、打印機、均質器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑：乙腈、正己烷、或二氯甲烷
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結果。
5.2 配液：
配液1：樣本提取液
90%乙腈，即V乙腈:V去離子水=V9：V1。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 谷物（大米、玉米、小米等低脂含量）及配合飼料
處理方法
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加8ml樣本提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉/分離心10分鐘；
2）取0.5ml上清，加入2ml去離子水，混勻；
3）取50μl進行分析。
稀釋倍數：20 檢測下限：6ppb
6 酶聯免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充玉米赤霉烯酮檢測試劑盒使用說明書分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。玉米赤霉烯酮檢測試劑盒使用說明書
實驗開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編 號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應：加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應30分鐘。
6.3 洗 滌：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯 色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終 止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應。
6.6 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應在終止反應后10分鐘內完成。
7 結果分析
7.1 百分吸光率的計算
標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即