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H7N9禽流感檢測試劑（健侖生物）

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產品簡介

H7N9禽流感檢測試劑

詳細介紹

H7N9禽流感病毒核酸熒光PCR測定試劑盒

Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit

H7N9禽流感病毒試劑產品專線:189 2505 2681

【產品名稱】

通用名稱：禽流感病毒H7N9核酸測定試劑盒

英文名稱：Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit

【包裝規格】 25T/盒

【用途】通過對樣本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特異性RNA核酸片段分別進行定性檢測，可用于臨床對可疑感染患者的病原學鑒別診斷。

【檢驗原理】本試劑盒采用聚合酶鏈式反應（PCR）技術結合熒光探針技術，對禽流感H7N9特異性核酸片段進行熒光PCR檢測。

【試劑盒主要組成成份】

序號	組分		數量		體積／人份
1	H7N9核酸熒光PCR檢測混合液		480?l×1		19?l
2	RT-PCR酶		28?l×1		1?l
3		DEPC-H2O		400?l×1
4		陽性對照品		30?l×1

說明：不同批號的組分不可以互換使用。

自備試劑：Trizol；氯仿；75%乙醇；異丙醇或磁珠法RNA提取試劑；本公司可以代為訂購或提供銷售商。

【儲存條件和有效期】試劑盒應在－20℃及以下溫度避光保存，有效期12個月。采用冰盒行運輸；熒光PCR檢測混合液反復凍融不宜超過3次。

【適用儀器】本試劑盒適用于ABI7000，ABI7300，ABI7500，ABI7900，MJ-chromo4，MX3000P，MX3005P，SmartCyclerⅡ，Rotor-Gene6000，Lightcycler R480，iCycleriQ4，iCycleriQ5，Bio-Rad CFX96，SLAN等多色熒光PCR儀及相應軟件。

【標本要求】

人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或*置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球將試管塞緊后，密閉送檢。標本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。【檢驗方法】

1.標本、對照品的核酸裂解處理

用商品化（取得科研許可證）的RNA提取試劑盒處理標本，具體操作參見該試劑盒說明書。

或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100?l氯仿，混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min，吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。

2.試劑配制

取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應管數）,振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。

3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進行PCR擴增反應。

4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上，*循環參數設置：

45℃×10min; 95℃×15min;循環一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環45次;單點熒光檢測在60℃，反應體系為25?l。

熒光通道檢測選擇：選用FAM通道。

備注：如使用ABI系列PCR儀，請務必于passive reference 和 quencher處均選擇“none”。

5. 閾值設定

閾值設定原則以閾值線剛好超過DEPC-H2O的zui高點。

6. 質量控制：試劑盒各對照品須達到以下要求，否則實驗視為無效。

Ct值
FAM通道（檢測H7）		HEX/VIC/JOE（檢測N9）
DEPC-H2O	UNDET或45		UNDET或45
陽性對照品	≤35		≤35

7. 試驗結果的判斷

通道	Ct值		結果判斷
1	FAM+HEX	UNDET或45	樣本低于檢測限，報告為陰性
2	FAM+HEX	≤43	FAM通道為H7基因陽性； HEX/VIC/JOE通道為N9基因陽性
3	FAM+HEX	43～45	復檢一次,如仍為43～45,則報告為陰性

進行定量檢測時，儀器生成標準曲線后，自動顯示待檢樣品定量值。

【參考值范圍】陰性（檢測對象H7N9為病原微生物，在健康人體中不存在）。

【對檢驗結果的解釋】實驗室環境污染，試劑污染，樣品交叉污染會出現假陽性結果；試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果。

【檢驗方法的局限性】當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于zui低檢測限5×103copies/ml時可能會發生假陰性的結果。

【產品性能指標】zui低檢測限：1×103copies/ml；

【注意事項】開始檢測前請仔細閱讀本說明書全文。

1. 整個檢測過程應嚴格分在三區進行：PCR反應體系的配制區；標本處理、加樣區；PCR擴增、熒光檢測及結果分析區。各區使用的儀器、設備、耗材和工作服應獨立。實驗后即請清潔工作臺，并進行消毒。

2. 使用不含熒光物質的一次性手套（經常替換）、一次性離心管、自卸式移液器和帶濾嘴吸頭。

3. 試劑準備和標本處理應使用超凈工作臺（負壓式）或防污染罩，以防止對環境污染。

4. 每次實驗應設置陰、陽性對照品。

5. 操作人員應經過專業培訓，具有一定經驗和操作技能。

6. 操作臺、移液器、離心機、PCR擴增儀等儀器設備應經常用10%次氯酸或75%酒精、紫外線燈或臭氧消毒處理。

7. 實驗中接觸過標準品和對照品的廢棄物品（如吸頭）、擴增完畢的離心管、標本等應進行無害化處理后方可丟棄。

8. 試劑使用前應在常溫下充分融化并混勻。

9. PCR反應混合液應避光保存。

10. 反應管中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊。

11. 不同批號的試劑請勿混用，請在有效期內使用試劑盒。

【公司名稱】廣州健侖生物科技有限公司

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【】
【電子郵件】 Service@jianlun.com Jim@jianlun.com
【騰訊】 712628581 712628582
【公司】 www.jianlun.com
【營銷中心】廣州市中山大道中358號東溪大廈B座511室
【公司地址】廣州市天河區車陂第十五工業園一幢4067室

H7N9型禽流感是一種新型禽人感染H7N9禽流感疫情防控方案（*版）衛生部《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（*版）》已確定了PCR核酸檢測作為H7N9禽流感確診手段。據悉2013年4月2日，國家CDC 已經啟動物流程序，將檢測H7N9禽流感病毒的核酸檢測PCR試劑探針及引物下發至各地方 CDC和各個診斷實驗室，以保證H7N9的準確診斷。流感，于2013年3月底在上海和安徽兩地*發現， 4月2日江蘇又報告4例確診病例。此次人感染的H7N9禽流感病毒是*發現的亞型流感病毒，尚未納入我國法定報告傳染病監測報告系統，目前國內外尚無針對H7N9禽流感病毒的疫苗。

世界動物衛生組織（OIE）規定，禽流感病毒的檢測采用雞胚病毒分離培養及致病力測定。中華人民共和國*和*已聯合發布8項有關禽流感病毒檢測的國家標準中，通用的《禽流感病毒通用熒光ＲＴ－ＰＣＲ檢測方法》和針對H7亞型的《Ｈ７亞型禽流感病毒熒光ＲＴ－ＰＣＲ檢測方法》都是基于核酸檢測的原理。熒光ＲＴ－ＰＣＲ檢測禽流感病毒系列方法，是利用分子生物學手段，檢測高致病性禽流感病毒核酸，無須做雞胚病毒分離培養，可將檢測時間從原來的２１天縮短為４個小時。

核酸檢測（nucleic acid testing，NAT）是直接檢測病原體核酸的一系列技術的總稱，可在尚未檢測到抗原或抗體前，先檢測到病毒核酸，其基本步驟包括核酸提取、擴增和檢測。也就是常說的基因檢測，是通過血液、其他體液或細胞對 DNA進行檢測的技術，可以診斷疾病，也可以用于疾病風險。由于核酸檢測是直接檢測病原體核酸，具有高敏感，高特異和短檢測窗口期等優點，為疫病早診斷、早治療、降低病死率以及控制疫情爭取時間。核酸檢測技術已經從定性檢測發展到實時熒光定量檢測。針對有些臨床需要，除能夠依據陰陽性判斷確證病例以外還可以依據核酸的載量判斷感染程度。

根據國家標準，H7N9禽流感病毒的核酸檢測采用的熒光RT-PCR檢測需要實時熒光定量PCR儀用于定量檢測，或PCR基因擴增儀用于定性檢測，以及依據H7N9人感染禽流感的核酸特定序列研制的基于引物和探針的PCR檢測試劑盒。
據悉2013年4月2日，國家CDC 已經啟動物流程序，將檢測H7N9禽流感病毒的核酸檢測PCR試劑探針及引物下發至各地方CDC和各個診斷實驗室，以保證H7N9的準確診斷。

廣州健侖生物科技科技有限公司（www.jianlun.com）10多年來一直專注核酸檢測，PCR基因擴增儀，實時熒光定量PCR儀等儀器和試劑的研制，在國家重點科技計劃等項目的支持下已有多個產品獲得科研注冊證，成為SARS、H1N1等疾病的法定檢測設備，這些儀器和試劑產品都是進行H7N9禽流感病毒核酸檢測的*內容。

關鍵詞：工作臺移液器超凈工作臺離心機擴增儀

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