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活化 Rac1 Pull-Down 和檢測試劑盒

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產品型號Thermo Scientific

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更新時間：2023-08-07 22:22:27瀏覽次數：55次

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產品簡介

活化 Rac1 Pull-Down 和檢測試劑盒

詳細介紹

Thermo Scientific 活化 Rac1 沉降和檢測試劑盒是一種全套試劑盒，能夠通過與 Pak1 蛋白結合結構域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測 GTP 結合 Rac1 GTPase。

活化 Rac1 沉降和檢測試劑盒包含純化的 GST-Pak1 蛋白結合結構域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結合/洗滌緩沖液、抗 Rac1 一抗、SDS 樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH3T3 細胞的裂解物進行驗證，已知該細胞系具有穩健的 Rac1 活性。

活化 Rac1 沉降和檢測試劑盒的特點：

?高靈敏度和精確度—優化試劑、特異性抗 Rac1 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結果
?經驗證—對 Rac1 檢測進行功能檢測，以確保質量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細胞類型有效

應用：
? 追蹤細胞分化、遷移、分裂和細胞骨架重排期間的 Rac1 GTPase 活化
? 研究 Rac1 依賴性板狀偽足形成
? 研究活化 Rac1 在癌癥和血管新生中的作用
? 監測使用生長因子刺激后的 Rac1 活性
? 篩查小分子抑制劑對 Rac1 活性的影響

使用經用于活化內源性 Rac1 的 GTPγS 處理的細胞裂解物相對于經滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗證了活化 Rac1 沉降和檢測試劑盒的活化 Rac1 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結合活化形式的 Rac1，在存在內源性 Rac1 時產生強烈信號。GDP 處理使 Rac1 進入 GDP 結合的非活化狀態，無論 Rac1 蛋白水平如何均幾乎不產生信號。對該試劑盒進行了優化，用于使用 HRP 結合型二抗（山羊抗小鼠 IgG，產品編號 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學發光底物（產品編號 34080）進行 Western 印跡檢測。試劑盒所含成分均足夠進行 30 次沉降實驗。

Rac1 背景：
Rho 家族 GTPase 具有許多細胞功能，包括細胞信號傳導、轉錄調節和肌動蛋白細胞骨架的組織。該 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。這些 GTPase 通過 GPCR、激酶、細胞因子和黏附受體實現從質膜到細胞溶質的信號轉導。通過蛋白羧基末端的香葉酰香葉酰脂質修飾來實現與質膜的黏附。Rac1 活化導致肌動蛋白聚合，并在細胞外圍表現為膜皺縮。Rac1 活化也會導致板狀偽足形成。

Rac1 GTPase 通過激酶、黏附分子或細胞因子/趨化因子受體在經生長因子（EGF、胰島素、PDGF、NGF）、整合素（纖連蛋白）或化學引誘物 (fMLP) 刺激后轉導信號。例如，EGF 刺激導致 PI3 激酶活化，導致細胞生長和細胞外圍重組（膜皺縮）。或者，通過 Rac1 的受體激酶信號轉導導致 MAPK 應激反應通路 SAPK (JNK) 和 p38 活化。用纖連蛋白刺激細胞導致整合素介導的細胞伸展。Rac1 的兩個主效應蛋白是 Pak1 和磷酸肌醇 4-磷酸鹽 5-激酶。Pak1 (p65 Pak) 是一種激活 JNK 通路的激酶，而磷酸肌醇 4-磷酸鹽 5-激酶促進肌動蛋白絲組裝。Rac 對 T 細胞發育和促進分化細胞至關重要。然而，GTPase 的 Rho 家族可在細胞信號轉導期間發揮激動作用以及在分化期間發揮拮抗作用。

更多產品數據
?通過特異性下游效應子測定小 GTPase 的激活
?在神經元細胞分化過程中檢測和定位活性 GTPase

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