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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
?產品名稱:甲型肝炎病毒(HAV)核酸檢測試劑盒價格
規格:48T/盒
類別:熒光-PCR法
運輸:低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途:生化實驗,合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。
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性能指標:點擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項:
①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?己酰 2 ug pYCP2 低溫運輸,-20℃保存
3,4-亞甲二氧苯胺 2 ug pYCP50 低溫運輸,-20℃保存
2-氟-4-硝基甲苯 2 ug pYCP50-poly 低溫運輸,-20℃保存
醋銅 2 ug pYCPlac 低溫運輸,-20℃保存
4-溴-2-氟三氟甲苯 2 ug pYCPlac22 低溫運輸,-20℃保存
庚烷 2 ug pYD 低溫運輸,-20℃保存
2-溴-3-基噻吩 2 ug pYCPlac22-EGFP 低溫運輸,-20℃保存
二正胺 2 ug pYCPlac33 低溫運輸,-20℃保存
鐵五水合物 2 ug pYES2.0 低溫運輸,-20℃保存
Fmoc-3-(3-啶基)-D-丙氨 2 ug pYest2/ct 低溫運輸,-20℃保存
3-甲氧基-N-基胺 2 ug pYES2/CT/α-Factor 低溫運輸,-20℃保存
-Boc-哌 2 ug pYES2-EGFP 低溫運輸,-20℃保存
D-環己基 2 ug pYES2-FLAG 低溫運輸,-20℃保存
氯代肟基乙乙酯 2 ug pYES2NT/A 低溫運輸,-20℃保存
2,4-二氯氟苯 2 ug pYES2NT/B 低溫運輸,-20℃保存
甲型肝炎病毒(HAV)核酸檢測試劑盒價格PGI(prostacycline) 人前列環素 CAS: 23458-6-7 規格: 5mg
VEGF 大鼠血管內皮細胞生長因子 CAS: 9004-35-7 規格: 25mg
PCT(Procalcitonin) 人降鈣素原 CAS: 9004-36-8 規格: 350mg
rT3(ReverseTri-iodothyronine) 人反*狀腺原氨 CAS: 9004-38-0 規格: 25mg
TNF- Alpha 大鼠腫瘤壞死因子α CAS: 9004-34-6 規格: g
6-keto-PGFa(6-keto-prostaglandin Fa) 人6酮前列腺素Fa CAS: 規格: g
TGF- Beta 大鼠轉化生長因子β CAS: 9004-34-6 規格: g
Pentosidine 人戊糖素 CAS: 規格: 200mg
SCF/MGF 大鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子 CAS: 規格: 0mg
NADPH 大鼠腺嘌呤二核苷磷 CAS: 規格: 0mg
MN(metanephrine) 人變腎上腺素 CAS: 23325-78-2 規格: 400mg
PDGF-AB 大鼠血小板衍生生長因子AB CAS: 58-7-9 規格: 200mg
DR(Dopamine D receptor) 人多巴胺D受體 CAS: 97468-37-6 規格: 00mg
ADRAA(adrenergic alpha-A receptor) 人腎上腺素能aA受體 CAS: 24356-60-3 規格: 500mg
PDGFsR- Alpha 大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α CAS: 58456-86-3 規格: 200mg
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