人血清白蛋白（HSA）是人血漿中酸性藥物的重要載體之一，并且可逆地結合大量不同的化合物。已為HSA確定了幾個不同的配體結合位點。其中，Site I被確定為主要的藥物結合位點之一。人血清白蛋白（HSA）I位結合檢測試劑盒是一種基于熒光的高通量測定法，用于確定小分子與HSA的結合。該測定法基于新型熒光探針HSA Blue™S1。它的特征是具有特別的光譜和結合特性，可與HSA的位點1結合。HSA Blue™S1在蛋白質結合狀態和蛋白質未結合狀態之間顯示出較大的熒光強度差異。在HSA Blue™S1存在下，小分子競爭HSA結合會導致熒光強度低。該測定法可用作高通量篩選工具，以確定在站點I處與HSA的總結合。百螢生物為您提供優質的人血清白蛋白（HSA）I位結合檢測試劑盒。
適用儀器
| 熒光酶標儀 | |
| Ex: | 365 nm |
| Em： | 480 nm |
| Cutoff： | 435 nm |
| 推薦孔板: | 純黑色孔板 |
| 讀取模式: | 頂部讀取 |
樣品分析方案
概述
在微孔板孔中制備樣品
從樣品中取出液體
添加鬼筆環肽-iFluor 488標記溶液（100μL/孔）
在室溫下染色細胞20至90分鐘
清洗細胞在顯微鏡下觀察樣品
注意：將小瓶加熱至室溫并在打開前短暫離心。
儲備溶液配制
將100 µL DMSO（組分D）加入HSA Blue™S1（組分A）中并充分混合。
注意：將未使用的HSA Blue™S1儲備溶液分裝成一小份保存在-20°C下，以避免凍融循環。
工作溶液配制
將50 µL HSA Blue™S1儲備溶液加入5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中，并充分混合。
注意：HSA Blue™S1工作溶液不應儲存，應立即使用。
注意：5 mL HSA Blue™S1工作溶液足以用于一個96孔板。
將250 µL HSA溶液（組分C）加入5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中并充分混合。
注意：5 mL HSA工作溶液足以用于一個96孔板。
使用HSA分析緩沖液（組分B）將藥物原液在3X工作溶液中稀釋至所需濃度。
注意：對于此處提到的方案，每孔的建議體積為50 µL。
操作步驟
以下方案可用作參考，實際應根據需要進行調整。
在孔中加入50 µL HSA Blue™S1工作溶液。
在孔中加入50 µL HSA工作溶液。
在各自的孔中加入50 µL藥物工作溶液。（總體積= 150 µL /孔）。
將樣品在室溫下孵育30分鐘。
使用熒光酶標儀在Ex / Em = 365/480 nm（截止= 435 nm）處檢測熒光的增加。
