TNF-a elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人TNF-α抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人TNF-α會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TNF-α抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗人TNF-α抗體與結合在包被抗體上的人TNF-α結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，TNF-α濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中TNF-α的濃度。

TNF-a elisa試劑盒構成：

96/48微孔板(1塊,已包被抗小鼠TNF-a單抗)、樣品稀釋液(1瓶)、*抗體工作液(1瓶)、酶標抗體工作液(1瓶)、底物稀釋液(1瓶)、終止液(1瓶)、洗滌液(20×,1瓶)、標準品(2000 pg/ml,2管,凍干粉)、OPD片(3片)、坐標紙(1張)。

TNF-a elisa試劑盒操作步驟：

1、設立標準孔8孔(根據樣品蛋白濃度可調整為6孔),每孔中先各加入樣品稀釋液100 ul,*孔再加標準品100 ul,混勻后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反復作對倍稀釋至第7孔,后,從第7孔中吸出100 ul棄去,使之體積均為100 ul。第8孔為空白對照。

2、加樣:待測樣品孔中每孔各加入待測樣品100ul。

3、將反應板置于37 ℃×120 min。

4、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上扣干。

5、每孔中加入*抗體工作液50ul。

6、將反應板充分混勻后置37 ℃×60 min。

7、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

8、每孔加酶標抗體工作液100ul。

9、將反應板置于37 ℃ 120 min。

10、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

11、每孔中加入底物工作液100ul, 置于37 ℃暗處反應5~10 min。

12、每孔中加入50ul終止液混勻。

13、用酶標儀在492 nm處測吸光值。