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上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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更新時(shí)間：2023-10-26 21:08:29瀏覽次數(shù)：921
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R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50 操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*502 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
GHBP 人生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
GROγ/CXCL3/MGSA 人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因γ 規(guī)格： 48T/96T
GROβ/CXCL2/MGSA 人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β 規(guī)格： 48T/96T
GROα/CXCL1/MGSA 人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α 規(guī)格： 48T/96T
GTE-AGE 人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物 規(guī)格： 48T/96T
GTE-AGE 人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物 規(guī)格： 48T/96T
Kim-1 人腎損傷分子1 規(guī)格： 48T/96T
Renin 人腎素 規(guī)格： 48T/96T
ADM 人腎上腺髓質(zhì)素 規(guī)格： 48T/96T
ADRA1A 人腎上腺素能a1A受體 規(guī)格： 48T/96T
ADRA1A 人腎上腺素能a1A受體 規(guī)格： 48T/96T
EPI 人腎上腺素 規(guī)格： 48T/96T
ACA 人腎上腺皮質(zhì)抗體 規(guī)格： 48T/96T
nephrin 人腎病蛋白 規(guī)格： 48T/96T
NAIP 人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白 規(guī)格： 48T/96T
NT-4 人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4 規(guī)格： 48T/96T
NT-3 人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3 規(guī)格： 48T/96T
NCAM-L1/CD171 人神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1 規(guī)格： 48T/96T
NSE 人神經(jīng)特異性烯醇化酶 規(guī)格： 48T/96T
NP-Y 人神經(jīng)肽Y 規(guī)格： 48T/96T
p2 人神經(jīng)髓鞘蛋白 規(guī)格： 48T/96T
NF 人神經(jīng)絲蛋白 規(guī)格： 48T/96T
NF 人神經(jīng)絲蛋白 規(guī)格： 48T/96T
人神經(jīng)生長(zhǎng)導(dǎo)向因子Slit2 ELISA Kit，48T/96T 人神經(jīng)生長(zhǎng)導(dǎo)向因子Slit2 ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T
fractalkine/CX3CL1 人神經(jīng)趨化蛋白 規(guī)格： 48T/96T
GFAP 人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白 規(guī)格： 48T/96T
NT 人神經(jīng)降壓素 規(guī)格： 48T/96T
NKB 人神經(jīng)激肽B 規(guī)格： 48T/96T
CVNPF 人神經(jīng)保護(hù)因子 規(guī)格： 48T/96T
NA 人神經(jīng)氨酸酶 規(guī)格： 48T/96T
ENA-78/CXCL5 人上皮中性粒細(xì)胞活化肽78 規(guī)格： 48T/96T
Ep-CAM/CD362 人上皮細(xì)胞粘附分子 規(guī)格： 48T/96T
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50 ESA 人上皮特異性抗原 規(guī)格： 48T/96T
EMA 人上皮膜抗原 規(guī)格： 48T/96T
St-Ag 人傷寒抗原 規(guī)格： 48T/96T
