目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環系列>> 磷脂酶C(PLC)測試盒微量法
貨號 | BK-01S6657 |
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商品介紹:
測定意義: 磷脂酶C(EC 3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動植物的組織和細胞中,在細胞代謝、細胞傳遞、生長發育等方面具有重要作用。 測定原理 磷脂酶C催化水解NPPC產生對硝基,在410nm處有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計、微量石英比色皿、恒溫水浴鍋。 |
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
磷脂酶C(PLC)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6657 |
實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:
① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
0.063µg 腸激(輕鏈) Enterokinase,Light Chain -20℃保存
125mL RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),pH7.4 RNase-Free TE Buffer,pH7.4 常溫保存
1 管 M15大腸桿菌 M15 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pBACPAK9 pBACPAK9 低溫運輸,-20℃保存
5次 大提柱式動物RNAout Maxi Column Animal RNAOUT 4℃保存
2 ug pcDNA3-EGFP pcDNA3-EGFP 低溫運輸,-20℃保存
馬鈴薯液體培養基(含) Potato liquid medium 250g
100mg 4- 甲基傘形酮 -β-D- 葡糖苷酸 4-MUG 4℃避光保存
50T 牛流行熱病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
5 mg Di-2-ANEPEQ Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
磷脂酶C(PLC)測試盒微量法Rabbit Anti-rat IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗大鼠IgG 規格: 0.1ml
Kif14 protein 驅動蛋白家族Member14蛋白抗體 規格: 0.2ml
SLC14A1/RACH1 尿素轉運型糖蛋白抗體 規格: 0.2ml
ESRRG/Estrogen Related Receptor gamma 雌激素受體相關蛋白3抗體 規格: 0.2ml
Deltex-1 DTX1抗體 規格: 0.2ml
SCUBE1 新型小板相關管內皮分泌蛋白SCUBE1抗體 規格: 0.2ml
G protein alpha G蛋白α抗體 規格: 0.2ml
Nestin 巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白抗體 規格: 0.1ml
HER2 receptor HER2受體抗體 規格: 0.1ml
Aggrecanase-2/ADAMTS-5 軟骨蛋白聚糖抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Paxillin(Ser83) 磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規格: 0.1ml
ABHD15 水解結構域蛋白15抗體 規格: 0.2ml