目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化磷酸化系列>> 轉(zhuǎn)氫酶2測試盒微量法
| 貨號 | BK-01S6567 |
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本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
轉(zhuǎn)氫酶2測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6567 |
商品介紹：
測定意義: TH位于線粒體的內(nèi)膜上，又稱為線粒體復(fù)合體六，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化，調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。 測定原理： NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+還原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，測定375nm光吸收的增加速率，來計算TH-2活性。 需自備的儀器和用品： 可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
1.5mL DNase I溶液 DNase I Solution 4℃（短期）或-20℃（長期）保存
100mL Potassium Acetate Solution(乙酸鉀溶液），8M Potassium Acetate Solution，8M 常溫保存
250mg 潮B干粉 Hygromycin B Powder 4℃避光保存
2 ug pProEX-Htb pProEX-Htb 低溫運輸，-20℃保存
棉子糖發(fā)酵管 20支
2 ug pCAMBIA1391Z pCAMBIA1391Z 低溫運輸，-20℃保存
PAC斜面培養(yǎng)基 Plate Count Agar 250g
1g -3- 丁酸 IBA 4℃保存
50T 立克次體PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
5mL 肝細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
100mL Alkaline Phosphatase Buffer-2（堿性緩沖液-2），2X Alkaline Phosphatase Buffer-2，2X 常溫保存
轉(zhuǎn)氫酶2測試盒微量法phospho-PI3K p85(Tyr458)/p55(Tyr199) 磷酸化磷脂酰肌醇激抗體 規(guī)格: 0.1mlbeta-Amyloid(1-16) (human) β淀粉樣肽（1-16）抗體（人） 規(guī)格: 0.1ml
HSP90 alpha 熱休克蛋白90α/HSP90 α抗體 規(guī)格: 0.2mlE.coli/EPEC 大腸埃希菌菌體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Tetranectin/CLEC3B/TNA 四連接素TN抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Transketolase(NT) 轉(zhuǎn)酮醇(轉(zhuǎn)羥乙醛)抗體（N端） 規(guī)格: 1ml
TXNDC9 胚胎干細胞相關(guān)蛋白TXNDC9抗體 規(guī)格: 0.2ml
SLC7A9 離子轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白SLC7A9抗體 規(guī)格: 0.2ml
VDAC 等電壓依賴性陰離子通道抗體 規(guī)格: 0.2ml
FOXO1A 叉蛋白O1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1ml
CDK3 周期素依賴性激3抗體 規(guī)格: 0.1ml
C12ORF53 12號染色體開放閱讀框53抗體 規(guī)格: 0.2ml
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環(huán)保在線