江苑生物的慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit）由優化的慢病毒包裝輔助質粒混合物（Packaging Mix）、表達eGFP蛋白的對照質粒（eGFP Control）和高效的轉染試劑（Transfection Reagent）組成，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒。

詳細介紹

產品簡介

江苑生物的慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit）由優化的慢病毒包裝輔助質粒混合物（Packaging Mix）、表達eGFP蛋白的對照質粒（eGFP Control）和高效的轉染試劑（Transfection Reagent）組成，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒。

Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結構蛋白；pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調節gag和pol基因表達的調節因子；還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白。江苑生物的慢病毒包裝系統產生的慢病毒感染目的細胞后不會再感染其他細胞，也不會利用宿主細胞產生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。

本試劑盒具有慢病毒包裝時間周期短（一周之內即可獲得純化好的高滴度慢病毒）和病毒滴度高的優勢，可應用于針對不同基因和藥物靶標的細胞學實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。

產品組分

組分名稱	儲存	產品貨號/規格
組分名稱	儲存	JY03021	JY03022	JY03023
Packaging Mix	-20℃	150 μL	300 μL	600 μL
eGFP Control	-20℃	7.5 μg	7.5 μg	7.5 μg
Transfection Reagent	4℃	240 μL	480 μL	960 μL

保存條件

冰袋運輸。Transfection Reagent 4 oC保存，長期不使用可-20oC保存。其余組分均于-20℃保存, 避免反復凍融。保質期1年有效。

注意事項

1．廢棄的含病毒的培養基中加入84消毒液（1:20左右），浸泡1天后丟棄。接觸過病毒的槍頭，離心管，培養板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理，也可以用煮沸處理半小時或常規滅菌（121℃，20 min）。

2．本產品僅用于科學研究。

3．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

還需準備的其他實驗材料

1．表達目的基因的慢病毒載體質粒：在慢病毒包裝前，需要先獲得感興趣的目的基因慢病毒載體，該載體可能表達目的基因、shRNA或microRNA等。以無內毒素高純度的試劑盒提取表達目的基因的慢病毒載體質粒，并將質粒DNA溶于無菌的TE或ddH₂O中，測定其濃度及純度，保證質粒DNA的A260/A280在1.8-2.0之間。江苑生物提供基因過表達、shRNA/miRNA介導的基因沉默、CRISPR/Cas9介導的基因敲除等服務。

2．慢病毒包裝用293T細胞株：良好的細胞狀態對病毒的包裝至關重要，避免細胞培養基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數較少的細胞，如果細胞是剛復蘇的話，更好傳兩代之后再包裝。

3．細胞培養基，血清和雙抗等

4．其他常用實驗耗材（如10 cm培養皿，離心管等）

使用說明

以10 cm培養皿為例：

1．293T細胞分盤：轉染前，將293T細胞以合適的比例傳代到10 cm培養皿中，當細胞長到70%-90%時準備轉染。

注：細胞要充分消化，成團細胞影響轉染效率。

2．轉染前換液：轉染前將需要轉染的細胞換成新鮮的*培養基（含有血清和抗生素），10 mL/10 cm皿。注：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應小心滴加盡量避免沖起細胞。抗生素和血清不會影響轉染效率，也不會在細胞轉染后導致細胞毒性。

3．轉染：取無菌的離心管，加入750 μL DMEM（不含血清和抗生素），7.5 μg表達目的基因的慢病毒載體質粒（自行提供），和15 μL Packaging Mix，用槍輕輕吹打混勻；再加入25 μL Transfection Reagent，用槍輕輕吹打混勻，請特別注意不可Vortex或離心。將混合液均勻滴加到提前換液的培養皿中，輕輕混勻，置于培養箱中培養，后續無需在數小時后更換培養液。

DMEM	750 μL
表達目的基因慢病毒載體質粒 (或者eGFP Control，作為對照)	7.5 μg (eGFP Control 7.5 μg)
Packaging Mix	15 μL
Transfection Reagent	25 μL

注：上述混合液室溫存放6 h內穩定。

4．病毒收集：轉染36 h左右后，吸取上清至新的離心管中，4℃保存。另外添加10 mL新鮮的*培養基到細胞中，注意不要沖起細胞。再次大約36 h后，收取上清至同一個離心管中。將兩次收集的上清用0.45 μm濾器過濾后轉移到新的離心管中（若沒有0.45 μm濾器，將上清3000 rpm，4 ℃離心5 min，棄沉淀亦可）。此時上清液中的病毒顆粒可以直接檢測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。

注：如果使用濾器過濾，只能使用低蛋白結合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不能用硝酸纖維素膜（NC）。

5．（可選）慢病毒濃縮：可以使用江苑生物的慢病毒濃縮試劑盒（JY03011）進行慢病毒濃縮，效率更高。同時，也可以自行配制PEG-8000慢病毒濃縮液濃縮慢病毒。

6．病毒分裝與保存：將病毒上清或濃縮后的病毒分裝，保存于-80℃。

注：病毒液一定要分裝，切忌反復凍融，凍融一次病毒滴度將降低20-60%。

293T 慢病毒包裝.jpg

圖1 江苑生物與**公司慢病毒包裝試劑盒包裝效率比較

相關產品

產品編號	產品名稱	產品規格
JY03011/JY03012	慢病毒濃縮試劑盒	50 mL/100 mL
JY03013/JY03014	PEG-8000慢病毒濃縮液	50 mL/100 mL
JY03021/JY03022/JY03023	慢病毒包裝劑盒	10T/20T/40T (10cm dish)
JY03024/JY03025/JY03026	慢病毒包裝質粒Mix	100 μg/200 μg/400 μg
JY03027/JY03028	慢病毒包裝質粒 pMD2.G	1 μg/100 μg
JY03029/JY03030	慢病毒包裝質粒 psPAX2	1 μg/100 μg
JY03031/JY03032	慢病毒包裝質粒 pCMV-VSV-G	1 μg/100 μg
JY03033/JY03034	慢病毒包裝質粒 pCMV-dR8.91	1 μg/100 μg
JY03035/JY03036	慢病毒包裝質粒 pMDLg/pRRE	1 μg/100 μg
JY03037/JY03038	慢病毒包裝質粒 pRSV-Rev	1 μg/100 μg