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上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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更新時(shí)間：2023-10-26 20:52:47瀏覽次數(shù)：865
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NMY51 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50操作方法（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
NMY51 感受態(tài)細(xì)胞100ul*502 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
NMY51 感受態(tài)細(xì)胞100ul*505 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
Gzms-B 人顆粒酶B 規(guī)格： 48T/96T
Gzms-A 人顆粒酶A 規(guī)格： 48T/96T
Cox V-IgM 人柯薩奇病毒IgM 規(guī)格： 48T/96T
Cox V-IgG 人柯薩奇病毒IgG 規(guī)格： 48T/96T
AHA 人抗組蛋白抗體 規(guī)格： 48T/96T
H2A-H2B 人抗組蛋白 規(guī)格： 48T/96T
EMAb 人抗子宮內(nèi)膜抗體 規(guī)格： 48T/96T
ATA 人抗滋養(yǎng)膜細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
ACA/CENP 人抗著絲點(diǎn)抗體 規(guī)格： 48T/96T
ANGA 人抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體 規(guī)格： 48T/96T
ANA 人抗中性粒細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
pANCA 人抗中性粒細(xì)胞核周抗體 規(guī)格： 48T/96T
cANCA 人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 規(guī)格： 48T/96T
ACA 人抗中性粒/中心體抗體 規(guī)格： 48T/96T
PCNA 人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體 規(guī)格： 48T/96T
Apo A1 人抗載脂蛋白抗體A1 規(guī)格： 48T/96T
TAP 人抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
SCL70/topoⅠ 人抗硬皮病抗體70 規(guī)格： 48T/96T
HBcAb 人抗乙型肝炎病毒核心抗體 規(guī)格： 48T/96T
HBcAb-IgM 人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗體 規(guī)格： 48T/96T
HBcAb-IgG 人抗乙型肝炎病毒核心IgG抗體 規(guī)格： 48T/96T
HBsAb 人抗乙型肝炎病毒表面抗體 規(guī)格： 48T/96T
HBeAb 人抗乙型肝炎病毒e抗體 規(guī)格： 48T/96T
AIRA 人抗胰島素受體抗體 規(guī)格： 48T/96T
AT 人抗 規(guī)格： 48T/96T
EMAb 人抗眼肌抗體 規(guī)格： 48T/96T
EMAb 人抗眼肌抗體 規(guī)格： 48T/96T
PA-IgG/M/A 人抗血小板抗體IgG/M/A 規(guī)格： 48T/96T
ATG 人抗胸腺細(xì)胞球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
SRP 人抗信號(hào)識(shí)別顆粒抗體 規(guī)格： 48T/96T
ACA-IgM 人抗心磷脂抗體IgM 規(guī)格： 48T/96T
ACA-IgG 人抗心磷脂抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T
ACA-IgA 人抗心磷脂抗體IgA 規(guī)格： 48T/96T
AMA 人抗心肌抗體 規(guī)格： 48T/96T
snRNP/Sm 人抗小核糖核蛋白/Sm抗體 規(guī)格： 48T/96T
AMA 人抗線粒體抗體 規(guī)格： 48T/96T
cmDNA 人抗細(xì)胞膜DNA抗體 規(guī)格： 48T/96T
NMY51 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50AGPA/PCA 人抗胃壁細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
ARA 人抗網(wǎng)硬蛋白抗體 規(guī)格： 48T/96T
SDA 人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體 規(guī)格： 48T/96T
