目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖酵解系列>> 3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測試盒微量法
| 貨號 | BK-01S6611 |
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實驗結果判斷我有妙招：
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求：
① 易揮發、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發生反應的物質要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6611 |
商品介紹：
測定意義: GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關鍵酶，與糖異生途徑、體內血糖濃度的維持和糖尿病的發生密切相關，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發揮重要作用。 測定原理 3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、無機磷和NAD，340nm處測定NADH的減少量可反映GADPH活性的高低。 需自備的儀器和用品 分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現稀釋現使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
氧化試劑 1g
5g 8- 羥基硫酸鹽 8-Hydroxyquinoline Sulfate 室溫避光保存
50T 蠟樣芽孢桿菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
5g 3-(3,4- 二羥基苯 )-L- 3-(3,4-Dithydroxyphenyl)-L-Alanine 室溫干燥保存
100mL ADA Buffer，0.5M,pH7.4 ADA Buffer，0.5M,pH7.4 常溫保存
10mL DNA上樣液 (紅色),6× DNAON 4℃保存
2 ug pGBKT7-Lam pGBKT7-Lam 低溫運輸，-20℃保存
液體乳糖培養基 Fluid Lactose Medium 250g
1瓶 COS-7 SV40細胞株 COS-7 SV40 低溫運輸和保存
PALCAM瓊脂平板（9cm） PALCAM Agar 10個/包
500U 熱敏 Antarctic Phosphatase -20℃保存
3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測試盒微量法RSL1D1 細胞衰老抑制基因蛋白抗體 規格: 0.2mlMouse Anti-Bov IgG/APC APC標記的小鼠抗牛IgG 規格: 0.1ml
PYGM 肌肉糖原磷酸化抗體 規格: 0.2mlSCF 干細胞生因子抗體 規格: 0.1ml
MAGE-1 黑色素瘤相關抗原抗體 規格: 0.1mlphospho-MEF2C(Thr300) 磷酸化肌細胞增強因子2C抗體 規格: 0.1ml
phospho-Kidins220 (Ser918) 磷酸化220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗體 規格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的驢抗人IgG 規格: 0.1ml
DNase I 脫氧核糖核酸1抗體 規格: 0.2mlTPD52L1/D53 瘤蛋白D53抗體 規格: 0.2ml
KLF9/BTEB1 轉錄因子KLF9抗體 規格: 0.1mlPhospho-Stat2 (Tyr690) 磷酸化信號轉導和轉錄激活因子2抗體 規格: 0.1ml
PDLIM3/ALP 輔肌動蛋白相關LIM蛋白抗體 規格: 0.2mlFAM81A FAM81A蛋白抗體 規格: 0.2ml
IDH3A 草酰琥珀酸脫羧α抗體 規格: 0.2mlPhospho-mu Opioid Receptor (Ser375) 磷酸化µ-型片受體抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1798) 磷酸化結節性硬化蛋白抗體 規格: 0.1mlPPAR gamma 過氧化活化增生受體γ抗體 規格: 0.2ml
ANKMY1 睪特異性錨樣蛋白1抗體 規格: 0.2mlphospho-SOX9(Ser181) 磷酸化轉錄因子SOX9蛋白抗體 規格: 0.1ml
NFIC 核因子1C型抗體 規格: 0.2mlNuMA 核有絲分裂器NuMA蛋白抗體 規格: 0.2ml
NT/NTS1/NTRH 神經降壓素抗體 規格: 0.1mlPhospho-FGFR1(Tyr653/654) 磷酸化堿性成纖維細胞生因子受體1抗體 規格: 0.1ml
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